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[实用新型]一种荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置-CN201821868085.5有效
发明人：朱希灿 -专利权人：比欧泰克生物技术服务(北京)有限公司
申请日： 2018-11-13 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： C12M1/40 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置，包括相互串联的核酸酶反应器、蛋白酶K反应器和中空纤维柱，所述核酸酶反应器的顶部连接有进液两路四口阀，核酸酶反应器的侧壁上安装有与内腔相通的填料进口，所述蛋白酶K反应器的底部连接有放液两路四口阀，蛋白酶K反应器的侧壁上安装有与内腔相通蛋白酶K填料进口。本荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置，初步纯化的荚膜粗糖消化成小分子寡核苷酸；串联进入蛋白酶K反应器，蛋白酶K分解消化为小分子氨基酸，消化成氨基酸多肽片段；在荚膜多糖大分子超滤浓缩的同时，分解成小分子氨基酸、寡核苷酸片段，分离并排出，解决了核酸酶/蛋白酶K残留，多糖疫苗浓缩与核酸、蛋白分离的难题。
反应器蛋白酶K 荚膜多糖核酸酶核酸去除疫苗蛋白小分子氨基酸内腔相通填料进口侧壁两路串联寡核苷酸片段氨基酸多肽本实用新型中空纤维柱分解消化超滤浓缩初步纯化蛋白分离底部连接多糖疫苗寡核苷酸糖消化小分子核酸放液荚膜进液残留浓缩

[发明专利]一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法-CN202111463437.5在审
发明人：吴迪;安淑英;张献新;朱德新 -专利权人：力因精准医疗产品（上海）有限公司
申请日： 2021-12-02 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法，所述一种核酸提取试剂盒，其组成成分包括：裂解结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液和蛋白酶K消化液，其中，所述蛋白酶K消化液在使用前需要用所需溶液溶解蛋白酶K，浓度在10‑40mg/mL。本发明所公开的一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法，配方中仍有蛋白酶K，漂洗过后，蛋白酶K不易残留，提取过程简单快捷，最终提取出来的核酸浓度大，纯度高，市场应用前景广阔。
一种核酸提取试剂盒方法

[发明专利]粘性生物样本消化剂及其制备方法-CN202011099347.8有效
发明人：农高惠;何林声 -专利权人：珠海市德灏生物科技有限公司
申请日： 2020-10-14 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了一种粘性生物样本的消化剂组合物，包括蛋白酶、稳定剂、和增效剂；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、组织蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶或者蛋白酶K；所述稳定剂包括糖类、环糊精和生物缓冲剂；增效剂为焦磷酸钠、三乙醇胺本发明还提供了一种粘性生物样本的消化剂，包含前面任一消化剂组合物，还包含去离子水。本发明还提供了前述的粘性生物样本的消化剂的制备方法：取稳定剂、增效剂和高渗剂溶于去离子水中，调节pH值至7.2‑7.4，加入蛋白酶，搅拌溶解，即得。本发明的消化剂溶液，液态稳定、不需用户使用前复配、不损伤病原菌、可常温保存、在病原菌最适pH范围内起效、可通用于不同检测项目。
粘性生物样本消化及其制备方法

[发明专利]一种分离培养脐带间充质干细胞的方法-CN201810737804.8在审
发明人：高戎戎;佟艳辉 -专利权人：上海中溢精准医疗科技有限公司
申请日： 2018-07-06 - 公布日： 2020-01-14 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及细胞工程领域，特别涉及一种利用混合消化酶分离培养脐带间充质干细胞的方法，该方法采用以下步骤：(1)用含有中性蛋白酶II、胰蛋白酶和胶原蛋白酶的混合消化酶处理脐带组织；(2)培养消化后得到的脐带间充质干细胞；该方法通过含有中性蛋白酶II、胰蛋白酶和胶原蛋白酶的混合消化酶，大大缩短了消化时间，能够有效减少对脐带间充质干细胞的损伤，提高细胞得率。
脐带间充质干细胞混合消化酶胰蛋白酶胶原蛋白酶中性蛋白酶消化分离培养脐带组织细胞工程有效减少得率损伤细胞

[发明专利]一种消化液的制备方法-CN201810467929.3有效
发明人：王诚;陆晓青;余美文;侯传玲;姚育英;孙爱静 -专利权人：绍兴市人民医院
申请日： 2018-05-16 - 公布日： 2021-04-13 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本申请涉及一种消化液的制备方法，属于测试用样品制备技术领域。称取EDTA粉末溶于PBS中，在配置时调整溶液pH适宜，搅拌均匀，配置EDTA母液；分别称取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于PBS溶液中后，将其按比例滴入EDTA母液，根据需要补充滴加PBS即可，所形成的消化液包括以下浓度的各组分：蛋白酶K 0.1‑2mg/ml，胰蛋白酶1‑100mg/ml，EDTA 0.1‑2mg/ml。
一种消化液制备方法

[发明专利]一种蛋白印记膜再生液的制备方法-CN202111168748.9在审
发明人：薛帮凯;樊菲;杨召军;田艳维;王硕;王立东 -专利权人：天津津科生物科技有限责任公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： G01N33/53 文献下载
摘要：本发明涉及分子印迹技术领域，具体涉及一种蛋白印记膜再生液的制备方法，采用盐酸胍处理蛋白酶K溶液，得到处理后蛋白酶K溶液；将低活性蛋白酶K与复合盐溶液混合配置，调节pH值，得到蛋白印迹膜再生液，蛋白酶K能够将蛋白酶解成小片段多肽，从而使模板蛋白更容易从孔穴中洗脱出来，达到比较好的洗脱效果，通过盐酸胍处理蛋白酶K溶液能够使蛋白酶K进行一定程度上的去折叠，蛋白酶K的活力与构象具有较强的相关性，通过诱导蛋白酶K进行去折叠处理，能够降低蛋白酶K的活性，从而保障洗脱后留下较多的有效识别位点，从而能够直接进行其他蛋白的检测，本发明具有比较好的效果和洗脱效率。
一种蛋白印记再生制备方法

[发明专利]一种检测乳粉中双歧杆菌的微滴数字PCR方法及应用-CN202210209958.6在审
发明人：李恩静;王丹;薛晨玉;杨红莲;耿健强;穆同娜;吴燕涛;何湘漪;郭淼;胡智恺 -专利权人：北京市食品安全监控和风险评估中心（北京市食品检验所）
申请日： 2022-03-04 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明的检测乳粉中双歧杆菌的微滴数字PCR方法，包括待测品的前处理步骤，所述前处理步骤包括：(1)对所述待测品的溶液进行离心，去上清；(2)进行冷热交替处理；(3)以蛋白酶K进行消化；(4)以溶菌酶进行消化；(5)以蛋白酶K和缓冲液GA进行消化。
一种检测乳粉中双歧杆菌数字 pcr 方法应用

[发明专利]一种生长猪胃-小肠-大肠仿生消化方法及对饲料有效能值估测的应用-CN202110598619.7有效
发明人：赵峰;王钰明;张虎;杜中原;解竞静;萨仁娜 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2021-05-31 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： G01N31/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种模拟生长猪胃‑小肠‑大肠消化过程并应用于测定饲料有效能值的方法。该方法包括如下步骤：将饲料样品粉碎过筛；制备胃缓冲液、小肠缓冲液、大肠缓冲液、模拟胃液(含胃蛋白酶)、浓缩模拟小肠液(含淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶)、浓缩模拟大肠液(含淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和纤维素酶)；将粉碎好的饲料样品装入单胃动物仿生消化系统的模拟消化管中，通过电脑程控按顺序分别加入模拟胃液进行胃模拟消化；加入浓缩模拟小肠液进行小肠模拟消化；加入浓缩模拟大肠液进行大肠模拟消化；消化结束后进行清洗，获得未消化残渣后，测定残渣及饲料样品的总能值，计算饲料有效能值。该方法克服了传统体外模拟消化方法中大肠消化阶段只含有纤维素酶而缺乏猪体内大肠液中含有一定活性浓度的淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的弊端，使测值与动物试验法的消化能、代谢能测值更加接近，且相关性更高、估测偏差更低的优势
一种生长小肠大肠仿生消化方法饲料效能估测应用

[发明专利]重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK-M1及制备方法-CN201811234322.7有效
发明人：岳敏;李民强 -专利权人：大连博格林生物科技有限公司
申请日： 2018-10-23 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M1及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M1，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
重组布氏白僵菌蛋白酶突变体 pk m1 制备方法

[发明专利]重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK-M2及制备方法-CN201811234362.1有效
发明人：岳敏;李民强 -专利权人：大连博格林生物科技有限公司
申请日： 2018-10-23 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M2及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M2，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
重组布氏白僵菌蛋白酶突变体 pk m2 制备方法

[发明专利]去人源的组织前处理方法-CN202211699877.5在审
发明人：余艳;葛虎;唐春燕;许寻寻;谭兵健;苏洁琼;何媛;裴丽琼 -专利权人：长沙金域医学检验实验室有限公司
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12Q1/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种去人源的组织前处理方法，包括步骤：对组织样本进行微离心后，保留沉淀和上清；向沉淀中加入蛋白酶K，36.5℃～37.5℃消化；消化后，高速离心，去上清；加入保留的上清，即可。本发明的去人源的组织前处理方法，通过对组织样本进行微离心后，保留上清，同时控制蛋白酶K的消化温度和时间，以及消化后高速离心去除上清，最后在沉淀中回补保留的上清，在各个步骤的密切配合下，最终提高了病原菌的检出能力
去人源组织处理方法

[发明专利]重组表达具有明胶酶活性p37k蛋白酶的方法及其提高p37k蛋白酶性能的方法-CN202210976243.3在审
发明人：侯勇;杨领振;夏庆友;王清浪;龚竞;程悦静 -专利权人：西南大学
申请日： 2022-08-15 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了重组表达具有明胶酶活性p37k蛋白酶的方法及其提高p37k蛋白性能的方法，本发明通过Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统表达得到约40kD的重组蛋白，然后激活后获得分子量约为25kDa的p37k蛋白酶，25kDa的p37k蛋白酶具有明胶酶活性，但是重组表达的p37k蛋白酶的对热敏感，研究发现在p37k蛋白酶加入中肠提取物和金属离子能够提高重组表达的p37k蛋白酶的热稳定性，并且，加入E64能够提高重组表达的p37k明胶水解活性。因此，中肠提取物和金属离子能够作为p37k蛋白酶的热稳定性保护剂，E64能够作为p37k明胶水解活性的增强剂，为进一步拓展p37k蛋白酶条件提供了基础。
重组表达具有明胶活性 p37k 蛋白酶方法及其提高性能

[发明专利]一种组织蛋白酶K的制备方法-CN202210561354.8有效
发明人：张静静;王斌;安文琪;邢体坤;宋路萍 -专利权人：晟明生物技术（郑州）有限公司
申请日： 2022-05-23 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种组织蛋白酶K的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述组织蛋白酶K；所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于组织蛋白酶K的N端后所得。本发明基于原核表达系统采用四种不同信号肽DsbA、OmpA、PelB和STII制备组织蛋白酶K，并通过对组织蛋白酶K表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导组织蛋白酶K分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是组织蛋白酶K周质空间分泌表达的最佳信号肽，不仅在组织蛋白酶K制品的表达和制备中具有良好的应用前景，还对开发组织蛋白酶K的单克隆抗体或小分子抑制剂及治疗骨质疏松症的药物研发具有重要意义。
一种组织蛋白酶制备方法

[发明专利]一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法-CN201910929819.9有效
发明人：樊英萍;王健鑫;刘雪珠 -专利权人：浙江海洋大学
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： C08J11/06 文献下载
摘要：本发明提出了一种酶解提取藤壶体内微塑料的方法，将藤壶组织加入磁性固定化蛋白酶K的缓冲液中加热酶解，磁铁分离，过滤，得到微塑料提取液，向提取液中加入改性硅藻土，充分搅拌吸附微塑料后过滤。本发明利用固定化蛋白酶K消解藤壶生物组织提取微塑料，同样的时长内消化效率比化学消解率高，采用改性硅藻土吸附微塑料粒子，从而实现环境保护，适合广泛应用。
一种提取体内塑料方法

[发明专利]基因工程改造蛋白酶K及其生产方法-CN201410190299.1在审
发明人：赵旭 -专利权人：天津旭晨科技有限公司
申请日： 2014-05-07 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开了提供一种基因工程改造的蛋白酶K，其酶活性为同种天然蛋白酶活性2倍以上，能够将生产周期缩短至3～4天，极大的提高了生产效率。通过合成与扩增获得蛋白酶K基因，然后通过克隆，转化，将蛋白酶K基因整合到酵母染色体上，通过酵母的筛选，选出能够高效表达目标蛋白的优质菌株，利用高密度发酵技术，进行高密度发酵表达蛋白酶K，然后经过蛋白质的分离纯化，获得高纯度高活性蛋白酶K。
基因工程改造蛋白酶及其生产方法

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