本发明公开了I型普鲁兰酶的突变体酶,突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了编码所述突变体酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还公开了突变体酶的制备方法,包括根据I型普鲁兰酶的氨基酸序列进行同源建模,基于序列比对分析和蛋白结构分析,选取突变位点并设计对突变引物对;以携带I型普鲁兰酶基因的载体为模板,分别进行定点突变反应,得到突变质粒;于突变质粒转化工程菌中复制表达对应的突变体酶。本发明的突变体酶具有更优的耐热性能和比酶活。
本发明公开了鞘磷脂酶突变体及其在sdLDL胆固醇检测中的应用,属于脂类含量检测技术领域。具体涉及五种鞘磷脂酶突变体:鞘磷脂酶突变体D118Q,鞘磷脂酶突变体N122D,鞘磷脂酶突变体N333E,鞘磷脂酶突变体Q376Y,鞘磷脂酶突变体MUT,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2~6所示所述鞘磷脂酶突变体在sdLDL胆固醇检测中的应用。本发明还公开了五种鞘磷脂酶突变体的编码基因,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:8~12所示。本发明的五种鞘磷脂酶突变体,与野生型鞘磷脂酶相比,活性更高,提高了2~3倍,用于sdLDL胆固醇检测时,所使用的活力单位更少,效率更高。
本发明公开了一种海洋链霉菌磷脂酶D突变体和应用,所述的磷脂酶D突变体是在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的基础上单点突变380位点氨基酸所得。本发明磷脂酶D突变体酶活力显著提高,实验测定突变体1(S380A)的酶活力是野生型的2.4倍,突变体2(S380F)的酶活力是野生型的1.1倍,突变体3(S380V)的酶活力是野生型的2.6倍,突变体4(S380M)的酶活力是野生型的1.2倍,突变体5(S380L)的酶活力是野生型的1.6倍。同时,本发明突变体的催化效率也显著提高,酶活力和催化性能的改善进一步提升了该酶的工业利用价值。
本发明公开了一种酯酶突变体及其应用。其中,该酯酶突变体具有SEQ ID NO:1所示序列发生氨基酸突变的序列,发生氨基酸突变的位点包括N51G位点。本发明的酯酶突变体是在SEQ ID NO:1所示的酯酶的基础上,通过定点突变的方法进行突变,从而改变其氨基酸序列,实现蛋白质结构和功能的改变,再通过定向筛选的方法,得到具有上述突变位点的酯酶,因此这些酯酶突变体具有酶特异性大幅度提高的优势,并且酶活性也有相应提高,从而大幅度降低了酶的使用量,降低了工业生产中的成本。
本发明属于生物化学领域,具体涉及Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用。具体技术方案为:一种Taq酶突变体,所述Taq酶突变体由野生型C‑Taq酶突变而来,野生型C‑Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,在野生型C‑Taq酶基础上至少进行如下突变:将所述野生型C‑Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。本发明通过对野生型C‑Taq酶的关键活性位点进行的分析并进行定点突变,并使用高低GC目的片段的多对SNP分型引物探针对候选突变酶进行测试,筛选到两个对单碱基错配有更好区分能力的酶。本发明提供的突变体酶的单碱基错配探针起峰更低,分型准确度更高。本发明提供的突变体酶对中高低GC位点都能很好扩增,普适应广;使用这些突变体酶可以有效节省筛选MGB探针的成本。
本发明公开了一种低温改良的外切菊粉酶突变体MutS117G,该突变体MutS117G具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。与野生酶InuAMN8相比,突变酶MutS117G的热活性和热稳定性发生了改变,突变酶MutS117G的低温活性变高但热稳定性变差。纯化的野生酶InuAMN8的最适温度为35℃,而突变酶MutS117G的最适温度为25℃;50℃处理后,野生酶InuAMN8的酶活从88%降至81%,而突变酶MutS117G的酶活从87%降至58%;55℃处理后,野生酶InuAMN8的酶活剩余70%,而突变酶则完全失活。本发明的突变体MutS117G可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。