[发明专利]检测食品中海狸鼠源性和狐狸源性成分的试剂盒及其应用在审
申请号: | 201910969310.7 | 申请日: | 2019-10-12 |
公开(公告)号: | CN110551799A | 公开(公告)日: | 2019-12-10 |
发明(设计)人: | 薛晨玉;姜洁;王丹;宋丽萍;穆同娜;毛婷;杨红莲;胡智恺;李恩静;郭淼;毕思丹 | 申请(专利权)人: | 北京市食品安全监控和风险评估中心(北京市食品检验所) |
主分类号: | C12Q1/6851 | 分类号: | C12Q1/6851;C12Q1/6888;C12N15/11 |
代理公司: | 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人: | 黄爽 |
地址: | 100094 北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供检测食品中海狸鼠源性和狐狸源性成分的试剂盒及其应用。试剂盒中含有检测食品中海狸鼠源性成分和狐狸源性成分的特异性PCR引物对及荧光探针,序列见SEQ ID NO:1‑3和SEQ ID NO:4‑6。本发明还提供基于所述引物对和荧光探针建立的食品中海狸鼠源性成分和狐狸源性成分的实时荧光定量PCR检测方法。本试剂盒特异性好,检测方法快速简单,准确性高,灵敏度好(可检测到样品中100 fg的海狸鼠源性、狐狸源性成分),为食品中海狸鼠源性、狐狸源性成分的检测提供了新方法。本发明提供的荧光定量PCR技术可以准确快速地同时实现对食品中海狸鼠源性、狐狸源性成分的鉴别检测,1~2h内即可完成检测。 | ||
搜索关键词: | 检测 荧光探针 试剂盒 实时荧光定量PCR 特异性PCR引物 试剂盒特异性 荧光定量PCR 鉴别检测 可检测 灵敏度 引物 应用 | ||
【主权项】:
1.检测食品中海狸鼠源性成分和狐狸源性成分的特异性PCR引物对,其特征在于,包括用于检测海狸鼠源性成分的上游引物1和下游引物1以及用于检测狐狸源性成分的上游引物2和下游引物2,它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1-2和SEQ ID NO:4-5所示。/n
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- 本发明涉及一种检测DNA聚合酶活性的方法及检测试剂盒。该方法将待测DNA聚合酶与足量的待补平模板混合,在dNTP存在的条件下,通过待测DNA聚合酶诱导待补平模板中的第一DNA片段延伸形成与凸出片段的碱基互补的补平片段得到补平模板。补平模板中的U碱基被足量的UDG酶消化去除,得到适于PCR扩增的模板,正向引物针对凸出片段设计,反向引物针对第一DNA片段的5’端设计,诱导第一模板链扩增。而未经补平的模板经消化酶去除U碱基后则无法与正向引物配对,即不能进行PCR扩增反应。将待测DNA聚合酶的CT值带入由DNA聚合酶标准品建立的标准曲线中,运算即可获得待测DNA聚合酶的酶活性。
- 一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法及试剂盒-201910119855.9
- 叶邦策;尹斌成;王婷 - 华东理工大学
- 2019-02-18 - 2019-12-24 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法,是在恒温条件下特异性检测靶标核酸;包括以下步骤:以两条分别与靶DNA序列互补的sgRNA序列,两组Cas9n‑sgRNA复合物分别与前间区序列邻近基序毗邻的匹配靶DNA序列结合后,通过Cas9n单口切割酶活性和恒温DNA聚合酶链置换活性,获得一条单链靶DNA序列,该序列在引物1和引物2,DNA聚合酶及Cas9n‑sgRNA复合物的共同作用下,在恒温条件下反复进行引物杂交,延伸,切割,链置换反应,扩增获得大量靶DNA序列,荧光染料与双链DNA产物结合产生荧光信号,实时测定反应体系中的荧光信号强度,与标准工作曲线对比,计算出靶标基因组或DNA序列的浓度。本发明尤其适用于核酸即时检测。
- 一种针对发酵乳中以醋化醋杆菌为主的系列杂菌污染的高精度特异性数字PCR检测方法-201910730701.3
- 周巍;史国华;张岩;李永波;杨岚;陈晨;王赞 - 河北省食品检验研究院(国家果类及农副加工产品质量监督检验中心、河北省食品安全实验室)
- 2019-08-08 - 2019-12-20 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种针对发酵乳中以醋化醋杆菌为主的系列杂菌污染的高精度特异性数字PCR检测方法。本发明的方法首先对待测杂菌进行死菌去干扰处理,然后对细菌DNA进行低杂质高纯度的提取,研发设计待测菌的特异性引物探针,设定ddPCR反应体系、反应程序及其退火温度,使得检测方法满足特异性、灵敏度和定量化的要求。本发明构建的方法特异性好,无非特异性扩增,具有良好的灵敏度及定量化优势。
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