[发明专利]差异代理技术在C·T碱基替换细胞富集中的应用有效
| 申请号： | 201910938686.1 | 申请日： | 2019-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN110564752B | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 杨进孝;徐雯;杨永星;康桂婷;武莹;李璐 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100097 北京市海淀区曙*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了差异代理技术在C·T碱基替换细胞富集中的应用。本发明的差异代理技术载体包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的esgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA组成；C·T碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上C·T碱基替换细胞富集，大大提高C·T碱基替换效率。 | ||
| 搜索关键词： | 差异 代理 技术 碱基 替换 细胞 富集 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.成套试剂，其包括sgRNA或与所述sgRNA相关的生物材料、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因或与所述功能丧失的筛选剂抗性基因相关的生物材料；/n所述sgRNA由靶向目标基因靶点序列的esgRNA和靶向所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA组成；/n所述靶向目标基因靶点序列的esgRNA结构如下：所述目标基因靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架；/n所述靶向所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA结构如下：所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列转录的RNA-sgRNA骨架；/n所述C·T碱基替换系统包括Cas9核酸酶或与所述Cas9核酸酶相关的生物材料和胞嘧啶脱氨酶或与所述胞嘧啶脱氨酶相关的生物材料；/n所述C·T碱基替换系统在靶向所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复；/n所述sgRNA骨架为S1)或S2)或S3)：/nS1)将序列1第571-646位中的T替换为U得到的RNA分子；/nS2)将S1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子。/nS3)与S1)或S2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子；/n所述esgRNA骨架为T1)或T2)或T3)：/nT1)将序列11中的T替换为U得到的RNA分子；/nT2)将T1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子；/nT3)与T1)或T2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子。/n
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