[发明专利]一种合成槲皮素-4’-葡萄糖苷的方法有效
| 申请号： | 201910316885.9 | 申请日： | 2019-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN110029118B | 公开（公告）日： | 2023-10-10 |
| 发明（设计）人： | 贾红华;李艳;唐可馨;翁婧媛;严明;陈可泉 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/60;C12P19/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京新慧恒诚知识产权代理有限公司 32424 | 代理人： | 王月霞 |
| 地址： | 211816 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种合成槲皮素‑4’‑葡萄糖苷的方法,将糖基转移酶UGT88A1或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因构建含双酶体系的重组菌;将重组菌使用IPTG作为诱导剂，在16~37℃诱导12~24 h，离心收集菌泥，利用超声破碎法破碎菌体，离心收集上清，得到粗酶液；将槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，在20‑40℃条件下反应8‑30h，使用甲醇终止反应，离心得到槲皮素‑4’‑葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示氨基酸序列发生突变，突变的氨基酸位点选自V18，I118，G181，S271中的一个或多个。该突变体制备简单，实现了槲皮素‑4’‑葡萄糖糖苷产量的提高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 合成 槲皮素 葡萄 糖苷 方法 | ||
【主权项】：
1.一种合成槲皮素‑4’‑葡萄糖苷的方法，其特征在于,包括如下步骤：1）构建具有双酶体系的重组菌：将糖基转移酶UGT88A1或其突变体的基因与蔗糖合酶基因连接得到重组质粒，采用热激法将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，得到含双酶体系的重组菌；2) 重组菌的诱导产酶：将重组菌接种于LB液体培养基中，25~40℃，取样，使OD600处于0.4～0.5时，使用IPTG作为诱导剂，在16~37℃，150~300r/min的条件下进行诱导12~24h，离心收集菌泥，利用超声破碎法破碎菌体，离心收集上清，得到粗酶液；3）将槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，在20‑40℃条件下反应8‑30h，使用甲醇终止反应，离心得到槲皮素‑4’‑葡萄糖糖苷。
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