[发明专利]一种基于对苯醌介导的大肠杆菌的制备及其检测方法在审
| 申请号： | 201910276041.6 | 申请日： | 2019-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN110029082A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 丁显廷;孙嘉慧;安东尼;黄佳 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12N1/20;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于对苯醌介导的大肠杆菌的制备及其检测方法，涉及生物医疗检测领域，制备方法将野生型大肠杆菌(WT)接种到具有双重抗生素浓度梯度的一系列锥形烧瓶中培养，并进行振荡浴；然后测量各锥形烧瓶的OD600值，再使野生型大肠杆菌(WT)生长的具有最高抗生素浓度的菌株繁殖到具有更高抗生素浓度梯度的下一轮抗生素抗性培养中，在以上步骤进行5轮后，收集低抗生素抗性大肠杆菌；10轮选择后，收集高抗生素抗性大肠杆菌。利用基于对苯醌介导的比色法和电化学检测法可以特异性和选择性的检测和标定大肠杆菌，同时还能潜在的区分抗生素抗性大肠杆菌。本发明简单灵敏，便捷有效，成本低廉，适合大范围推广和生产，具有较大的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 抗生素抗性 对苯醌 介导 制备 抗生素 野生型大肠杆菌 浓度梯度 锥形烧瓶 检测 电化学检测法 检测领域 生物医疗 比色法 潜在的 振荡浴 标定 菌株 接种 灵敏 测量 繁殖 生长 应用 生产 | ||
【主权项】：
1.一种抗生素抗性大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：步骤1‑1，将野生型大肠杆菌(WT)接种到具有双重抗生素浓度梯度的一系列锥形烧瓶中培养，并进行振荡浴；步骤1‑2，测量步骤1‑1后各锥形烧瓶的OD600值(溶液在600nm波长处的吸光值)，以测量野生型大肠杆菌(WT)培养液的浓度；步骤1‑3，使野生型大肠杆菌(WT)生长的具有最高抗生素浓度的菌株繁殖到具有更高抗生素浓度梯度的下一轮抗生素抗性培养中；步骤1‑4，在步骤1‑3进行5轮选择后，收集低抗生素抗性大肠杆菌；步骤1‑5，在步骤1‑3进行10轮选择后，收集高抗生素抗性大肠杆菌。
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- 2015-12-01 - 2019-03-29 - C12N1/36
- 本发明提供了一种裂殖壶菌的选育方法，包括(1)制备裂殖壶菌初始菌体的菌悬液；(2)将所述菌悬液涂布于甘蔗渣水解液固体培养基上培养；(3)挑选所述甘蔗渣水解液固体培养基上成活的单菌落，分别传代培养；(4)选择能够稳定传代且菌体DHA产量高的菌株。本发明的选育方法简单快捷，成本低廉，且选育的菌株能够在未脱毒甘蔗渣水解液中生长，DHA产量高。
- 一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法-201811360010.0
- 葛蔚;柴超;张勇;王忠;唐超;张文丽;王清吉;林英庭 - 青岛农业大学
- 2018-11-15 - 2019-03-15 - C12N1/36
- 本发明公开了一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，取瘤胃液，加入丙酸钠和无机盐培养基于恒温摇床，避光培养，逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养，将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。本发明的有益效果是通过筛选驯化得到了一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌菌株，该菌株具有应用于饲料发酵，主要是牧草和秸秆的有氧发酵，起到改善饲料营养价值和降解部分污染物的作用。
- 一种酵母菌富集铜离子的驯化培养和检测方法-201510605672.X
- 李旺;宋洋洋;李元晓;武晓红;丁轲;张光勤 - 河南科技大学
- 2015-09-22 - 2019-03-15 - C12N1/36
- 本发明涉及一种酵母菌富集铜离子的驯化培养和检测方法；驯化培养方法为首先配制不同铜离子浓度驯化培养基和基础培养基；将所培养的产朊假丝酵母种子液，接种到不同铜离子浓度驯化培养基中，摇床培养；选择所培养的菌液中OD600值高，上清液中铜离子的含量较低的产朊假丝酵母菌作为出发菌种；取出发菌种菌液，接种到最低含铜离子的浓度为的驯化培养基中，摇瓶培养后，再吸取菌液接种到浓度为次低的驯化培养基中，按照此方法，接种培养；最后检测不同代次产朊假丝酵母的铜离子转化率，当铜离子的转化率不变或降低时，该菌种即为富铜酵母生产菌种。本发明所培养的酵母菌可在高铜离子浓度培养基中生长，对铜离子的转化效率高，为酵母新功能开发提供基础。
- 一种诱导葡萄球菌产生耐药性的方法-201811195256.7
- 娄华;曾森;李嘉怡;陈仁贵;朱海琪;吴志胜;刘俊杰;刘霜霜 - 佛山科学技术学院
- 2018-10-12 - 2019-02-19 - C12N1/36
- 本发明公开了一种诱导葡萄球菌产生耐药性的方法，所述方法包括了：(1)葡萄球菌菌种的选择；(2)筛选抗生素；(3)抗生素标准品的溶液配制；(4)最小抑菌浓度的测定：微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度；(5)传代诱导；(6)耐药性测定，采用纸片扩散法测定每一代葡萄球菌对头孢唑啉的耐药性。本发明中实验操作需要的仪器设备少，并且后期材料处理难度也大大地降低了，因此本发明能够较好的解决操作难度和资金成本的问题，并且本发明提高了诱导效率、准确率和成功率；本发明中所述方法的操作也较其他方法更加便捷方法通俗易懂。
- 一种用于消除沉积物中硫化物的微生物复合菌群-201510405484.2
- 赵阳国;郑宇;白洁;田伟君;胡泓;佘宗莲;高孟春;郭亮 - 中国海洋大学
- 2015-07-10 - 2019-02-01 - C12N1/36
- 本发明的目的是提供一种用于消除沉积物中硫化物的微生物复合菌群，能够解决纯菌生态位狭窄、无法适应沉积物环境、容易在较短时间内被淘汰、生物量低、代谢缓慢等问题。本发明的复合菌群，包含芽孢杆菌(Bacillus spp.)、弧菌(Vibrio spp.)、假单胞菌(Pseudomonas spp.)和脱硫弧菌(Desulfovibrio spp.)。本发明的微生物复合菌群的菌种来源于硫化物含量丰富的近海养殖区沉积物，经过驯化获得，避免了在应用时由于环境差异较大而导致的适应过程；且在去除硫化物的过程中，菌群结构能够保持较好的稳定性。
- 一种提高小球藻对苯酚耐受性和降解率的方法-201510765578.0
- 孙予罕;王丽波;赵权宇;汪靓 - 中国科学院上海高等研究院
- 2015-11-11 - 2019-02-01 - C12N1/36
- 本发明提供一种提高小球藻对苯酚的耐受性和降解率的方法，包括：首先选择对数生长期的小球藻，在一定温度和光照条件下，以一定初始密度摇床培养于含有苯酚的培养基中，培养设定的时间作为一个适应性进化周期；然后将经过一个周期进化的小球藻稀释，取与上述步骤相同的初始密度、在相同的条件下摇床培养于另一培养基中，培养相同时间；再重复上述培养过程，直至小球藻的生长速率和对苯酚的降解率趋于稳定。本发明通过对小球藻进行适应性进化实验，提高了小球藻的生长速率、对高浓度苯酚的耐受性和降解率，同时降低初始接种密度，缩短完全降解高浓度苯酚所需要的时间，节省废水处理成本，为工业废水的处理提供优势藻株。
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