[发明专利]凝血因子Ⅹ激活剂RVV-Ⅹ的制备方法及制得的RVV-Ⅹ有效

专利信息
申请号: 201811636120.5 申请日: 2018-12-29
公开(公告)号: CN109652398B 公开(公告)日: 2021-07-20
发明(设计)人: 谢永华;李存存 申请(专利权)人: 上海太阳生物技术有限公司
主分类号: C12N9/64 分类号: C12N9/64
代理公司: 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 代理人: 刘伟;赵青朵
地址: 201108 *** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明属于生物技术领域,公开了凝血因子X激活剂RVV‑X的制备方法及制得的RVV‑X。本发明所述制备方法以圆斑蝰蛇毒为原料,溶于缓冲液后经分子筛层析柱进行粗分离,缓冲液洗脱,收集具有RVV‑X活性的洗脱峰,浓缩采用弱阳离子柱进行分离纯化,用含0‑0.5mol/L NaCl的缓冲液梯度洗脱,收集具有RVV‑X活性的洗脱峰。本发明所述制备方法原料圆斑蝰蛇毒易于获得,采用分子筛层析柱进行粗分离,分子筛填料物理性质稳定,避免了每次的重新装柱过程,更利于放大生产。本发明所述制备方法通过两步过柱分离可以获得79KD和98KD的两种RVV‑X,制备步骤少,得率高,制得的两种RVV‑Ⅹ纯度高,且稳定性好。
搜索关键词: 凝血 因子 激活剂 rvv 制备 方法
【主权项】:
1.凝血因子Ⅹ激活剂RVV‑Ⅹ的制备方法,包括如下步骤:1)圆斑蝰蛇毒溶于缓冲液后经分子筛层析柱分离,缓冲液洗脱,用核酸蛋白检测仪监测,根据A280nm值绘出洗脱线,采用发色底物法检测确定具有RVV‑Ⅹ活性的洗脱峰,收集浓缩;2)将步骤1)活性峰浓缩液,采用弱阳离子柱进行分离,用含0‑0.5mol/L NaCl的缓冲液梯度洗脱,用核酸蛋白检测仪监测,根据A280nm值绘出洗脱线,采用发色底物法检测分别收集具有RVV‑Ⅹ活性的洗脱峰。
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