[发明专利]一种检测微生物的方法及其应用在审

专利信息
申请号: 201810381387.8 申请日: 2018-04-25
公开(公告)号: CN108517352A 公开(公告)日: 2018-09-11
发明(设计)人: 温永俊;江明;韩慧敏;宣铁民 申请(专利权)人: 内蒙古华星康为生物科技有限公司
主分类号: C12Q1/6816 分类号: C12Q1/6816;C12Q1/6834;C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/32;C12R1/01
代理公司: 北京高沃律师事务所 11569 代理人: 刘奇
地址: 010000 内蒙古自治区呼和浩特*** 国省代码: 内蒙古;15
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明提供了一种检测微生物的方法,属于核酸快速诊断技术领域。本发明方法包括以下步骤:1)提取样本核酸,得模板核酸;2)将模板核酸与染色基团和PCR buffer混合,得混合样品;3)混合样品在加热变性后,或与非特异性核酸染料反应后,得染色样品;4)测定颜色值,根据颜色深浅变化测定核酸含量和鉴定微生物阴阳性;所述染色基团为经过修饰的探针或非特异性核酸染料,所述探针包括特异性检测探针和随机检测探针;非特异性核酸染料包括甲基蓝、甲基绿、吡罗红、SYBR Green、UltraPure溴化乙锭或Accublue荧光素。本发明无需扩增酶促反应,在5~10min内即可出检测结果,灵敏度高,且特异性好。
搜索关键词: 探针 微生物 非特异性 核酸染料 混合样品 模板核酸 染色基团 种检测 核酸 特异性检测探针 颜色深浅变化 特异性核酸 加热变性 检测结果 快速诊断 染料反应 染色样品 随机检测 样本核酸 溴化乙锭 灵敏度 甲基蓝 甲基绿 扩增酶 阴阳性 荧光素 与非 修饰 应用
【主权项】:
1.一种检测微生物的方法,包括以下步骤:1)提取样本核酸,稀释到103~1015拷贝/μL,得模板核酸;2)将步骤1)得到的所述模板核酸与染色基团和PCRbuffer混合反应,得染色样品,所述染色基团包括非特异性核酸染料、经过5’端或3’端修饰的特异性检测探针或随机检测探针;所述修饰包括染料、荧光素、生物素、FTIC、抗原或半抗原标记;非特异性核酸染料包括甲基蓝、甲基绿、吡罗红、SYBR Green、UltraPure溴化乙锭或Accublue荧光素;3)将步骤2)得到的所述染色样品与显色基团反应,根据染色基团与显色基团的颜色反应深浅测定核酸含量和鉴定微生物阳性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于内蒙古华星康为生物科技有限公司,未经内蒙古华星康为生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201810381387.8/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 绵羊胸膜肺炎支原体病毒荧光探针及快速检测方法-201610970795.8
  • 孙世国;温嘉;曾志超;王鹏;陈其文;吕婷 - 陕西益守康生物科技有限公司
  • 2016-11-04 - 2019-10-29 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一类绵羊胸膜肺炎支原体病毒(MO)荧光探针及其快速检测方法。所采用的技术方案是:该类探针由负载在氧化石墨、还原石墨烯、二氧化锰等不同材料表面,由Cy3、Cy5、FAM、罗丹明B(RB)等不同荧光染料标记的具有不同碱基数量的单链DNA序列组成。该类荧光探针可在10分钟左右对MO进行特异性荧光检测,最低检测限可达到1.0416copies/μL。与传统的PCR检测技术相比较,本发明具有快速灵敏、简便价廉、荧光可视化等优势。可以实现对MO的实时、快速、准确检测,为绵羊胸膜肺炎的监控及防治创造条件,应用前景广阔。
  • 一种沙门氏菌的检测方法及检测试剂盒-201710161236.7
  • 陈俊华;王荣萍;温俊林;陈曼佳 - 广东省生态环境技术研究所
  • 2017-03-17 - 2019-08-27 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种沙门氏菌的检测方法及检测试剂盒。以沙门氏菌特异性核酸适体为分子识别元件,在沙门氏菌作用下打开茎环结构核酸H1,并与茎环结构核酸H2相互作用,形成部分双链DNA,包含核酸内切酶识别序列,在核酸内切酶的作用下切割H2,释放富含G碱基的核酸序列。在Hemin的作用下,形成具有类似HRP催化活性的G四聚体结构,可催化氧化显色反应,使无色底物变成蓝色。本发明方法具有较高的灵敏度,其检测限位10 cfu/mL;还具有很好的特异性,常见的其他菌对检测不产生影响。整个检测过程可在室温下完成,具有操作简单、经济便宜等优点。检测结果可直接观察,无需使用检测仪器。可直接检测活菌,无需对菌进行裂解。
  • 方法-201780064931.X
  • 尼古拉斯·安东尼·史密斯;丹尼尔·约翰·特纳;丹尼尔·乔治·福德姆;詹姆斯·怀特 - 牛津纳米孔技术公司
  • 2017-10-20 - 2019-08-13 - C12Q1/6816
  • 一种用于确定在包括额外组分的样品中两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量的方法,所述方法包括:(i)使所述样品与两个或更多个探针的组在适于所述靶多核苷酸与所述探针杂交的条件下接触,其中:(a)每个探针包括非杂交区域和与所述靶多核苷酸中的一个特异性杂交以形成杂交探针的杂交区域;并且(b)所述组中的探针的所述杂交区域包括一个或多个非天然核苷酸;(ii)使步骤(i)中制备的所述样品与跨膜孔接触,单链多核苷酸但不是双链多核苷酸可以穿过所述跨膜孔,并且对所述跨膜孔施加电位差,使得所述样品中的所述杂交探针与所述孔相互作用;(iii)测量具有限定窗口内的持续时间的电流阻塞,其中:(a)存在于所述探针的所述杂交区域中的所述一个或多个非天然核苷酸由于所述探针与其靶多核苷酸杂交而增加或减少所述电流阻塞的所述持续时间,使得与所述杂交区域中存在对应的一个或多个天然核苷酸时相比,由于所述杂交探针与所述孔的相互作用而在所述窗口内发生的电流阻塞的比例增加;并且(b)每个杂交探针产生指示所述探针的电流阻塞;以及(iv)将所述测量的电流阻塞与所述探针相关联,从而确定所述样品中所述两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量。
  • 基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏度DNA荧光分析方法-201510287942.7
  • 孔金明;胡伟文;顾淑梅;胡琼;张学记 - 南京理工大学
  • 2015-05-29 - 2019-08-09 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏DNA荧光分析方法。将捕获DNA的3’端固定到磁珠表面,与目标DNA片段杂交后,在末端脱氧核苷酸转移酶的催化作用下,对目标DNA的3’端进行加尾,生成聚胸腺嘧啶,铜离子可以与聚胸腺嘧啶相互作用,抗化学酸钠将二价铜还原成一价铜,一价铜再歧化形成铜纳米粒子附着在目标DNA的聚胸腺嘧啶模板上,铜纳米粒子具有良好的荧光特性,荧光强度与目标DNA的杂交情况相关,通过荧光分析的方法可以实现对DNA片段的高灵敏度、高选择性检测,可应用于分子识别、临床诊断、环境监测及食品安全等领域中DNA样品的检测。
  • 等位基因核酸富集方法-201910311573.9
  • 杨敬敏;徐辉;李文涛 - 上海韦翰斯生物医药科技有限公司
  • 2019-04-18 - 2019-07-05 - C12Q1/6816
  • 本发明提供一种富集核酸延伸产物的方法,包括a.在探针与核酸杂交的条件下将探针与含有核酸的样品接触,其中,所述核酸包含等位基因对,所述探针包括分别靶向等位基因对中两条等位基因的至少两种探针,并且靶向其中一条等位基因的探针的延伸受到抑制,b.延伸探针,和c.富集延伸产物。本发明提供用于单倍型分离的试剂盒。
  • 使用纳米孔的高速分子感测-201811586278.6
  • R.W.戴维斯 - 吉尼亚科技公司
  • 2014-10-23 - 2019-05-24 - C12Q1/6816
  • 本发明涉及使用纳米孔的高速分子感测。描述使用纳米孔来捕获和确定分子的身份的方法和设备。所述分子可使用大量的纳米孔(例如,在1小时内读取180百万个分子的132,000个纳米孔)以平行方式快速地进行计数、分选和/或分箱。分子的这种快速捕获和读取可用于捕获探针分子或已经产生以代表最初的难以检测的分子或最初分子的部分的其它分子。可发生样品分子或样品分子的代用品的精确计数。在一些情况下,所述设备和方法捕获特定分子或分子的代用品并且保持于所述纳米孔中并且接着将其喷射于洁净溶液中以类似于流式细胞仪执行捕获、分选和分箱功能。
  • 一种基于磁纳米球的可重置分子逻辑门的合成及应用-201910068007.X
  • 张思奇 - 台州学院
  • 2019-01-24 - 2019-04-26 - C12Q1/6816
  • 本发明属于分析化学的光学分子逻辑门技术领域,涉及一种可重置、免酶和高灵敏的miRNA三元智能检测方法的建立。所述的分子逻辑门是基于磁性纳米球和相应的探针DNA构建而成的,以标记在DNA上的羧基荧光素(FAM)的荧光强度相对值作为判断依据,当相对荧光强度大于0.3时,输出为“1”,当相对荧光强度小于0.3时,输出为“0”。所述的分子逻辑门体系包含多个级联的OR逻辑门和INHIBIT逻辑门,它们可以来检验实际样品中三种不同的miRNA(miR‑21、miR‑155和miR Let‑7a)是否存在以及三者的存在组合。该逻辑检测体系结合了靶标催化发夹状DNA的组装技术,提高了多目标分析的灵敏度,对于肿瘤标志物的诊断有着潜在的应用价值。
  • 一种microRNA快速检测的方法-201811310085.8
  • 朱文远;梁晓琳;周琳莹;郝杰;温其霖;潘宏程 - 桂林理工大学
  • 2018-11-05 - 2019-03-22 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种microRNA快速检测方法。首先设计与目标物两端完全互补的probe1和probe2,合成24nM的金纳米粒子,将probe1、probe2分别标记在金纳米表面,得到AuNPs‑probe1和AuNPs‑probe2溶液。当靶目标存在时,目标物与两个金探针杂交形成三明治结构,发生聚集,从而导致溶液的颜色发生酒红色到紫色的变化。本发明通过检测杂交混合液的颜色变化反应,从而间接达到检测目标物的目的,这避免了昂贵仪器的使用,成本低且操作简便,能够广泛地运用到实际的检测中。
  • 一种RET基因重组检测方法-201811407996.2
  • 黄国英;陈慧平;章金涛;许芳;赵倩伟;杨卫民 - 郑州海普生物医药科技有限公司
  • 2018-11-23 - 2019-03-19 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种RET基因重组检测方法,包括如下步骤:S1、将待检测的组织切成切片;S2、将步骤S1中得到的切片在67℃下烤片2h;S3、将经过步骤S2烤片的切片进行脱蜡;S4、将经过步骤S3脱蜡的切片在装有煮开的柠檬酸盐修复液的高压锅中煮5min;S5、将经过步骤S4处理后的切片置于37℃胃蛋白酶工作液中消化;S6、将经过步骤S5处理后的切片进行脱水;S7、自然晾干;S8、杂交变性;S9、盖玻片洗涤及复染。利用本发明方法,只要发生融合(已知及未知的)就可以识别出来,检出率高。
  • 一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其应用-201710059097.7
  • 陈瑞;张志刚;张磊 - 江西华牧生物科技有限公司
  • 2017-01-23 - 2019-03-12 - C12Q1/6816
  • 基于现有小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法的不足,本发明旨在提供一种用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的试剂盒,其包括:探针分子溶液、聚苯乙烯纳米球溶液、阳性对照质粒、阴性对照,其中所述探针分子的结构为:报告荧光基团‑CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA。该方法实现起来十分简单,不需要使用昂贵的PCR仪器以及昂贵的ELISA检测试剂,仅需简单的荧光检测设备即可实现结果的检测和分析,检测时间短、灵敏度高,可以广泛用于食品安全检测,特别是基层食品卫生监督部门的食品安全检测。
  • 一种检测微生物的方法及试剂盒-201811548347.4
  • 温永俊;江明;韩慧敏;宣铁民 - 内蒙古华星康为生物科技有限公司
  • 2018-12-18 - 2019-03-08 - C12Q1/6816
  • 本发明属于核酸快速诊断技术领域,具体涉及一种检测微生物的方法及试剂盒。本发明通过将样本中的核酸与特异性捕获探针混合或接触,特异性捕获探针获得目标基因,通过对目标基因整个基因组的每个碱基进行染色或者连接多个检测基团的方式进行检测,检测基团可自显色或显色试剂结合发生显色反应。由于本发明的检测方法大大的增加了检测信号的数量,所以无需扩增酶促反应,在5~10min内即可出检测结果,灵敏度高,且特异性好。
  • 非对称发夹靶标捕获低聚物-201380013675.3
  • J·卡尔森;R·波尔纳;S·T·布伦塔诺 - 简·探针公司
  • 2013-02-01 - 2019-02-26 - C12Q1/6816
  • 本发明提供改善的茎‑环靶标捕获低聚物以及使用方法。此类靶标捕获低聚物具有形成环的靶标结合片段,所述环在形成茎的茎片段的侧面。所述茎片段是不等长的。在不存在靶核酸但提供良好靶标灵敏度的情况下,此类探针显示出很少结合至或不结合至固定化探针。所述探针尤其可用于多种检测方法,其中存在检测多个靶核酸(例如,检测靶基因的多个多态性形式)的多个靶标捕获低聚物。
  • 一种检测核糖核酸酶的方法及其试剂盒-201610077918.5
  • 张必良;刘霭珊;曹亮;克雷格·梅洛 - 广州市锐博生物科技有限公司
  • 2016-02-03 - 2019-02-12 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种检测核糖核酸酶的方法及其试剂盒。本发明提供了一种检测待测样本中核糖核酸酶的方法,包括如下步骤:1)设计合成RNA探针;2)将待测样本和含有所述RNA探针的反应体系混匀,得到反应液;3)检测所述反应液荧光强度,根据荧光强度确定待测样本是否含有核糖核酸酶。本发明的方法优势体现在:1)灵敏度高(0.1pg/ml RNase A,比Ambion高100倍);2)可实时观测;3)可高通量检测:能同时对大量样本进行检测;反应体积小,成本低,简单快速(1小时左右),适宜实验室的常规质控;4)广谱性:可检测不同样本中,不同核糖核酸酶的含量和含量;5)安全:不使用任何有害化合物。
  • 一种基于southern blot的端粒长度检测方法-201811146214.4
  • 顾凯强;葛远龙;李国庆;杨奇飞;黄洪斌;周君 - 江苏凯强医学检验有限公司
  • 2018-09-28 - 2019-02-01 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种基于Southern Blot的端粒长度检测方法,所述方法包含步骤:(a)从血液中提取人类基因组DNA,并配置酶切体系,反应条件为37℃水浴孵育16h,(b)将DNA酶切样本放入0.7%琼脂糖凝胶中电泳,反应条件为电压1.5V/cm,时间16h,反应过后修整琼脂糖凝胶,将其放置在干胶仪上,温度50℃,干燥1‑2h,涉及生物技术领域。该基于Southern Blot的端粒长度检测方法,避免了转膜效率对实验结果的影响以及克服了转膜对于DNA片段大小的限制,并且实验多步骤都在同一块凝胶上进行,使得实验操作连贯,实验结果稳定性高。
  • DNA双标记效率检测方法-201810807074.4
  • 侯森;明永飞;孙丽丽;戴洪萍;吕冰;侯兰梅 - 山东华谱检测技术有限公司
  • 2018-07-21 - 2019-01-04 - C12Q1/6816
  • 本发明提供了一种DNA双标记效率检测方法,包括:制作两份具有荧光标记的互补单链DNA溶液,记为溶液A和B;制作没有荧光标记的序列相同的两条互补单链DNA溶液,记为溶液C和D;调节溶液A~D,使单链DNA的浓度一致;将等体积的溶液A和B以及缓冲液混合退火处理,得到溶液一;将等体积的溶液A~D混合,进行退火处理,得到溶液二;将溶液一和溶液二分别通过预设的激光共聚焦荧光相关谱光路中进行探测计算,分别获取溶液一和溶液二的荧光分子处于三态的比例p1和p2,以及溶液一和溶液二的相关曲线的y轴截距G1(0)和G2(0),通过预置算法计算DNA双标记效率DDLE。借此,本发明可以更精确的计算DNA双标记效率。
  • 一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法-201810829360.0
  • 岳爱琴;杜维俊;赵晋忠;赵巧玲;王敏;高春燕;张永坡 - 山西农业大学
  • 2018-07-25 - 2018-12-18 - C12Q1/6816
  • 本发明涉及植物遗传育种技术领域,具体涉及一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法;通过设计加入DNAzyme标记的检测大豆皂苷合成酶基因的特异性探针,用正反引物对大豆皂苷合成酶基因进行扩增,利用核酸外切酶特异性地识别并酶切大豆皂苷合成酶基因,形成单链目标片段,再与探针发生杂交链式反应,将探针中的DNAzyme标记释放,最后通过显色反应判断样品中的皂苷类型;本发明方法快速、准确、高效且廉价,可应用于各种代谢产物类型的基因检测体系,特别是对作物品质育种和特异性材料的筛选均有很高的实用价值。
  • 精子端粒长度的检测试剂、试剂盒及应用与检测方法-201810831973.8
  • 李丹;江南 - 苏州呼呼健康科技有限公司
  • 2018-07-26 - 2018-11-30 - C12Q1/6816
  • 本发明提供了精子端粒长度的检测试剂、试剂盒及检测方法,属于生物医学检验领域。本发明提供的精子端粒长度的检测试剂,能方便实际检测,且检测结果更可靠稳定;将精子端粒长度的检测试剂应用到精子端粒长度检测中和制备检测试剂盒中,都能方便得到准确可靠的结果,而检测试剂盒更加方便进行检测,检测方法操作简单,结果易于判定,易于临床推广使用,实用性较强。
  • 一种用于NGS测序的核酸目标序列富集的方法-201810357468.4
  • 曹顺 - 曹顺
  • 2018-04-20 - 2018-09-18 - C12Q1/6816
  • 本发明提供了一种用于NGS测序的核酸目标序列富集的方法,所述方法包括:目标序列探针的设计,将各个目标序列探针进行等温扩增以形成目标序列探针互补链,连接各个目标序列探针,在探针上加上结合部分,得到含有结合部分的单链目标序列探针池。
  • 核酸分子检测方法及检测试剂盒-201710315401.X
  • 邱全芊;陈泰龙;骆纪东 - 长庚大学
  • 2017-05-08 - 2018-09-14 - C12Q1/6816
  • 本发明的题目是核酸分子检测方法及检测试剂盒。本发明提供一种核酸分子检测方法。核酸分子检测方法包括下列步骤:准备寡核酸探针以及双链嵌合染料,寡核酸探针包括寡核酸链、报道荧光分子与荧光淬灭分子,其中报道荧光分子连接于寡核酸链的第一端,且荧光淬灭分子连接于所述寡核酸链的相对于第一端的第二端;使寡核酸探针结合至目标核酸,以形成局部双链结构;双链嵌合染料嵌入至局部双链结构中,藉此双链嵌合染料激发报道荧光分子发出荧光信号;以及根据荧光信号探测目标核酸。本发明还提供一种核酸分子检测试剂盒。
  • 一种微粒载体的标记和鉴别方法及其应用-201810102290.9
  • 杜权;王华全 - 武汉尚码生物科技有限公司
  • 2018-02-01 - 2018-09-14 - C12Q1/6816
  • 本发明公开了一种微粒载体的标记和鉴别方法及其应用。通过在一定的偶联条件下,使一定量的至少一种可检测的标记分子与一定量的微粒载体接触并结合,使标记分子特异性地标记微粒载体。通过定性和定量地检测与微粒载体偶联的标记分子,鉴别所述被标记的微粒载体的类型。本发明利用人工合成的、带有一定量可检测基团的标记分子,实现了对微粒载体的精准定量标识,显著提高了对同一类微粒载体标记的稳定性和可区分度。基于本发明提供的微粒载体的标记和鉴定方法,本发明还提供了一种核酸分子的检测方法和一种微生物的检测方法,能够对数十种已知的核酸分子和数十种已知的微生物快速、便捷的定性和定量检测,具有高通量、高精度、稳定性好的优点。
  • 一种沙门氏菌的检测方法及其应用-201810309780.6
  • 陈瑞;张志刚;张磊 - 江西牧威利元生物科技有限公司
  • 2018-04-09 - 2018-09-14 - C12Q1/6816
  • 一种沙门氏菌的检测方法,包括如下步骤:步骤一,制备探针分子:根据沙门氏菌的基因组结构和保守序列,选取沙门氏菌的invA基因作为检测目标片段,根据GenBank:EU348365公开的沙门氏菌invA基因序列,设计探针分子,所述探针分子序列为5’‑GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT‑3’,所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记;步骤二,将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子混合,然后加入待测样品,检测荧光。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top