[发明专利]一种犊牛小肠上皮细胞体外培养方法有效
| 申请号： | 201710607158.9 | 申请日： | 2017-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN107164312B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 谭秀文;刘倚帆;宋恩亮;靳青;游伟;赵洪波;张相伦 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种犊牛小肠上皮细胞体外培养方法。取犊牛小肠，将肠管撑开器导入肠管并将肠管撑开，用PBS液冲洗肠道胎粪直至流出的液体清亮，然后用止血钳封闭肠管一端，注满蛋白酶消化液后再封闭肠管另一端，置于摇床37℃消化1‑1.5小时，收集液体离心洗涤两次，最后加入培养液接种培养；12‑24小时后细胞贴壁生长，3‑4天后有约90％细胞贴壁，即为小肠上皮细胞。由于本发明中蛋白酶消化液直接注入肠腔内，不与肠道外壁接触，所以不会将肠道外壁的成纤维细胞和肌肉细胞消化下来，最大程度地保证了上皮细胞的纯度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 犊牛 小肠 上皮细胞 体外 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种犊牛小肠上皮细胞的体外培养方法，其特征是，取犊牛小肠，将肠管撑开器导入肠管并将肠管撑开，用PBS液冲洗肠道胎粪直至流出的液体清亮，然后用止血钳封闭肠管一端，注满蛋白酶消化液后再封闭肠管另一端，置于摇床37℃消化1‑1.5小时，收集液体离心洗涤，最后加入培养液接种培养；所述蛋白酶消化液为：每100ml DMEM液中加入50±5mg胶原蛋白酶，40±4mg中性蛋白酶，充分溶解、过滤后使用。
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