[发明专利]注射用A群链球菌药物的制备方法

摘要

本发明公开了一种注射用A群链球菌药物及其制备方法。药物的组分含量是：A群链球菌占3%~6%(W/W)，麦芽糖占13%~26%(W/W)，蛋氨酸占55%~75%(W/W)，氯化钠占0.3%~0.5%(W/W)，青霉素G钾6%~12%(W/W)。制备方法包括群链球菌冷冻管活化及血斜面培养、接种培养、灭活、配制、冷冻干燥等步骤。本发明的药物保持A群链球菌在青霉素G钾灭活过程中不被完全杀死，使其保留了使癌细胞裂解的抗癌活性，并且保持A群链球菌经青霉素灭活细胞壁缺损后的稳定衡一状态，能够在使用时恢复活性低副作用的情况下发挥其临床疗效，而该制备方法能够制备出稳定的产品。

主权项

1.一种注射用A群链球菌药物的制备方法，其特征在于组分含量按质量份是：A群链球菌（Streptococcus A Group）占3~6份，麦芽糖占13~26份，蛋氨酸占55~75份，氯化钠占0.3~0.5份，青霉素G钾占6~12份；配制规格为1KE的药物1万支按顺序包括以下步骤：a. A群链球菌冷冻管活化及血琼脂斜面培养：取冻干管一支，直接加入无菌生理盐水溶解后，接入5％酵母粉培养基中于37±0.5℃±活化培养18‑24小时，然后涂片镜检，确认链球菌生长正常无污染后，将菌株接入血琼脂斜面于37±0.5℃培养18‑24小时；b.接种培养：采用三级培养法，第一级培养系将菌种从血琼脂斜面接种入一级酵母浸膏粉培养基内于37±0.5℃培养20小时，培养液经涂片镜检，确认链球菌生长正常无污染后，按5% v/v的接种量接入二级酵母浸膏粉培养基中，于37±0.5℃培养20小时，与接种二级同样的方法，将菌种接入三级酵母粉培养基内，于37±0.5℃培养20小时；c.灭活：取3级培养的A群链球菌菌体，经0.45μm滤膜过滤，经无菌0.9%氯化钠溶液分三次洗去残余培养基，获得生产用A群链球菌菌体；加入12万µ/ml青霉素G钾的10%麦芽糖的无菌溶液400ml，pH值为7.5，37℃水浴加入30分钟后，继续升温至45℃加热20分钟；d.配制：向上述菌液中加入继续加入12万µ/ml青霉素G钾的0.9%氯化钠无菌溶液100ml摇匀，本溶液用磷酸二氢钾和氢氧化钠将pH值预调至7.5；取样后，按2000版«中国生物制品规程»中规定的浓度测定方法测含量，补加按1‑ 2%无菌蛋氨酸溶液至1万ml，本溶液用磷酸二氢钾和氢氧化钠将pH值预调至7.5，搅匀，灌装，每瓶装量1ml；e.冷冻干燥：将灌装好的药液，半压塞放入冻干机内，制品通过搁板降温，在‑40℃预冻2小时，然后抽真空至0.3‑0.4mbar，经过搁板加热，在12小时内逐渐升温至0℃，抽真空至0.09‑0.15mbar，在4小时内逐渐升温至30℃，维持30 ℃干燥3小时，冻干结束，压塞、压铝盖出箱，即制得成品。