[发明专利]一种高磷酸化卵清蛋白的微波快速制备方法在审
| 申请号： | 201410726332.8 | 申请日： | 2014-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN104558157A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 涂宗财;段邓乐;王辉;沙小梅;黄涛;钮培佩 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | C07K14/77 | 分类号： | C07K14/77;C07K1/113 |
| 代理公司： | 南昌市平凡知识产权代理事务所 36122 | 代理人： | 夏材祥 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 一种高磷酸化卵清蛋白的微波快速制备方法，将25 g卵清蛋白溶解于500 mL蒸馏水中，加入25 g焦磷酸钠，慢慢搅拌30 min至完全溶解并混合均匀后，将混合液置于高压密封罐中，采用微波加热，设置微波功率为560-700 W，时间为8-13 min，待样品迅速冷却至室温，透析之后冷冻干燥即可获得一种高磷酸化卵清蛋白。本发明制备的卵清蛋白起泡性高，是未处理蛋白的5-8倍，操作简单，工艺合理，成本低，生产周期短。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 磷酸化 蛋白 微波 快速 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种高磷酸化卵清蛋白的微波快速制备方法，其特征是：（1）蛋白溶液的配制：将25 g卵清蛋白溶解于500 mL蒸馏水中，配制成浓度为5%的溶液；（2）磷酸化修饰：于上述溶液中加入25 g焦磷酸钠，慢慢搅拌30 min至完全溶解并混合均匀；（3）微波处理：将磷酸化修饰的蛋白混合液取200 mL放置于800 mL高压密封罐中，采用微波加热处理；（4）透析：将微波完成的溶液迅速冷却至室温后，置于流动的蒸馏水中进行透析处理；（5）冷冻干燥：样品置于‑80 ℃冰箱中预冻5 h后，于冷冻干燥机冷冻24 h后即得高磷酸化卵清蛋白粉；（6）真空包装，成品；（7）产品检测：检测产品磷酸化程度。
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制备时，4-硝基邻苯二甲酸与甲醇在强酸的催化作用下酯化反应得邻苯二甲酸二甲酯半抗原中间体4-硝基邻苯二甲酸二甲酯；4-硝基邻苯二甲酸二甲酯和锌粉在强酸的作用下发生还原反应得邻苯二甲酸二甲酯半抗原；采用戊二醛法，将所述半抗原与卵清白蛋白偶联反应，即得包被原DMP-OVA。本发明的包被原可以与被分析物邻苯二甲酸二甲酯形成直接竞争关系，都能特异性识别抗邻苯二甲酸二甲酯的多克隆抗体，为建立免疫检测方法奠定基础。此外，包被原的制备方法简单，稳定性好，成本低，易于工业化生产。
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制备时，4-硝基邻苯二甲酸与异辛醇在强酸催化作用下酯化反应得4-硝基邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯；4-硝基邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯和锌粉在强酸作用下发生还原反应得邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯半抗原；采用戊二醛法，将所述半抗原与卵清白蛋白偶联制得所述人工包被原DEHP-OVA。本发明的人工包被原可以与被分析物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯形成直接竞争关系，都能特异性识别抗邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯的多克隆抗体，为建立免疫检测方法奠定基础。此外，本发明的制备方法简单，稳定性好，成本低，易于工业化生产。
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