[发明专利]一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法

摘要

本发明公开了一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，该方法是针对传染性脾肾坏死病毒特异性片段的6个区域设计4种特异性引物，利用LAMP快速扩增模版DNA特异性区域，通过加入染料，在自然光下通过肉眼观察颜色变化就能判断结果，整个反应不超过2h，又由于LAMP呈瀑布式扩增，因此其扩增效率非常高，灵敏度是普通PCR的100倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，操作简单，可实现现场实时检测，因此本发明是一种检测快速、灵敏度高、操作简便、成本低，检测结果易于判断的传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法。

主权项

一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）DNA提取：从染病鳜鱼的肾脏组织中提取基因组DNA；2）DNA片段扩增：取1μL提取的基因组DNA加入到25μL反应液中，混匀后置63℃恒温水浴中进行LAMP扩增1h，所述反应液由下述成分组成：其中，F3引物的核苷酸序列为GCCTGGAAGACATACCCGA；B3引物的核苷酸序列为CGTCATGTACGCGGACATG；FIP引物的核苷酸序列为CGCAG GCAATCCATAAGCGCTTTTCATACCGCCGGAATCTTACC；BIP引物的核苷酸序列为CCGGAGCCGTGCGCAATAAATTTTCGAGGAACGACACGTACTG；3）向反应体系中再加入0.5μL绿色荧光染料并进行阴阳性判断，若呈绿色为阳性，则鳜鱼中感染有传染性脾肾坏死病毒；若呈现橙色为阴性，则鳜鱼中无传染性脾肾坏死病毒。