[发明专利]致病性嗜水气单胞菌的LAMP检测试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201010611571.0 | 申请日： | 2010-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN102140512A | 公开（公告）日： | 2011-08-03 |
| 发明（设计）人： | 潘晓艺;沈锦玉;郝贵杰;姚嘉赟;徐洋;尹文林 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 梁寅春 |
| 地址： | 313001 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 使用方便，检测快速的致病性嗜水气单胞菌的LAMP检测试剂盒，包括细菌DNA提取试剂和LAMP反应试剂，反应试剂中含引物FIP：GTTTCCCCCATCAGATCCGTGGTTTACGCCACCCAGTTTCTTG、BIP：TCCGGCCTGTATACCTGTATCAGGTTAAACCAGGGTGTCATCGCT、F3：TGATGGCACGAGACATCCA、B3：TGCTTGATCCCCTTGCTACT；致病性嗜水气单胞菌的LAMP检测方法：(1)DNA抽提；(2)致病性嗜水气单胞菌的LAMP扩增；(3)显色检测。本发明适合检测致病性嗜水气单胞菌。 | ||
| 搜索关键词： | 致病性 水气 单胞菌 lamp 检测 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
致病性嗜水气单胞菌的LAMP检测试剂盒，包括细菌DNA提取试剂和LAMP反应试剂，所述LAMP反应试剂中含有用于检测致病性嗜水气单胞菌的LAMP扩增用核酸引物组，该引物组包含引物AH.PV‑FIP、引物AH.PV‑BIP、引物AH.PV‑F3、引物AH.PV‑B3，其特征是所述引物AH.PV‑FIP、引物AH.PV‑BIP、引物AH.PV‑F3、引物AH.PV‑B3分别为：AH.PV‑FIP：GTTTCCCCCATCAGATCCGTGGTTTACGCCACCCAGTTTCTTGAH.PV‑BIP：TCCGGCCTGTATACCTGTATCAGGTTAAACCAGGGTGTCATCGCTAH.PV‑F3：TGATGGCACGAGACATCCAAH.PV‑B3：TGCTTGATCCCCTTGCTACT所述LAMP反应试剂包括以下组分：(1)LAMP预反应液：20～25mM pH为8.2～9.0的Tris‑HCl、6～10mM硫酸镁、10～12mM氯化钾、8～12mM硫酸按、0.1～0.2％Triton X‑100(或是0.1～0.2％Tween 20)、1～1.6mM dNTP、0.6～1.0M甜菜碱、1.5～2.2uM所述引物AH.PV‑FIP、1.5～2.2uM所述引物AH.PV‑BIP、0.15～0.3uM所述引物AH.PV‑F3、0.15～0.3uM所述引物AH.PV‑B3；(2)聚合酶：每微升含8个活性单位的Bst DNA聚合酶；(3)LAMP反应稳定液：由矿物油或液体石蜡油组成；(4)LAMP反应显色液：含有10％SYBR Green工的荧光染料；所述细菌DNA提取试剂包含以下组分：TE缓冲液，5‑15mM Tris，0.5‑1.5mM EDTA，pH 8.0；溶菌酶，浓度10‑20mg/mL，pH8.0；蛋白酶K溶液，浓度10‑20mg/mL，pH8.0；Tris饱和酚，pH8.0；乙酸钠，浓度2‑5mol/L；乙醇，浓度95％。
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