[发明专利]新的人蛋白激酶C抑制蛋白编码序列、其编码的多肽及制备方法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及一种新的II型人蛋白激酶C抑制蛋白人PKCI-2的编码序列，该序列编码的蛋白是人体中天然存在的HIT家族的一个新成员，是人hPKCI的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

蛋白质激酶C(protein kinase C，简称“PKC”)是一族在细胞内信号传导通路中起重要作用的丝/苏氨酸激酶。当细胞外信号分子作用于细胞膜上的酪氨酸激酶受体或G蛋白耦连受体后，激活了胞质内的磷脂酶，促使质膜上的PIP₂(4，5-二磷酸磷脂酰肌醇)水解为IP₃(1，4，5-三磷酸肌醇)和DAG(二脂酰甘油)。IP₃动员细胞内源钙到细胞溶质，使细胞内钙离子浓度上升，DAG激活蛋白激酶C。活化的蛋白激酶C通过对靶蛋白上丝/苏氨酸残基的磷酸化改变靶蛋白的生物活性，进而引起细胞应答。PKC活化和细胞应答之间的中间步骤尚不清楚。已有的证据表明，PKC可通过抑制GAP(GTPase activatingprotein)来提高ras蛋白活性(Berry，Eur.J.Biochem(1990)189，205)。PKC途径也可活化另一丝/苏氨酸激酶Raf进而影响蛋白激酶级联反应中的MAP激酶、RSK活性从而活化靶基因(Siegel，J.N.，J.Biol.Chem.(1990)265，18472)。PKC也可通过影响转录因子如c-Jun，NF-kB的活性来促进基因的转录(Boyle W.J.，Cell(1991)64，573；Silvia，S，Pharmac.Ther.(1991)51，71)。

蛋白激酶C抑制蛋白(protein kinase C inhibitor，简称PKCI)属于HIT(histidine triad)蛋白家族。此家族的成员具有保守的由三个组氨酸构成的基序(his-x-his-x-his)(Seraphin B.，DNA Sequence(1992)3，177；Robinson K，Biochem.J.(1994)662)。根据氨基酸序列比较，此蛋白家族又可分为两个亚族。其中一个在C端相对较为保守，且其哺乳动物同源蛋白之间的氨基酸顺序同一性大于94％。已经发现的此亚族的成员包括人(Homo sapien)hPKCI(Brzoska PM，1996，登录号U51004)，牛(Bos taurus)PKCI-1(Pearson JD，1990，登录号U9405)，小鼠(Mus musculus)PKCI-1(Kelein MG，未发表序列，登录号U60001)，玉米(Zea mays)ZBP14(Simpson GG，1994登录号Z29643)等。另一亚族以人FHIT为代表(Ohta M，1996，登录号U46922)，此外还包括裂殖酵母(Schizosaccaromyces pombe)二核苷酸5′，5-P1，P4四磷酸(Ap4A)不对称水解酶(Huang Y.Biochem.J.(1995)312，925)等。此亚族内部的氨基酸序列同一性在50％左右，而在两个亚族间的同一性只有20％左右。两个亚族共有一个大约100个氨基酸的核心区，在靠近C端和N端的区域则有较大变异(Lima CD，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1996)93，5357)。