[发明专利]一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法

权利要求书

1.一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，6种美拉德反应产物为糠氨酸、呋喃酮、5-羟甲基糠醛、糠醛、呋喃甲基酮和甲基糠醛；该方法包括以下的步骤：

1）样品前处理

称取试样2 g，精确至0.0001 g，置于50 mL离心管中，加入12 mL水，涡旋混匀，超声提取30 min，振荡20 min；加入5 mL 0.15 mol/L草酸溶液，振荡20 min；加5 mL 40 g/100mL三氯乙酸溶液，振荡10 min，4000 r/min离心5 min，取上清液至25 mL容量瓶；向剩余残渣加入5 mL 4 g/100mL的三氯乙酸溶液，涡旋混匀后振荡10 min，4000 r/min离心5 min，合并上清液，加入4 g/100mL三氯乙酸溶液定容至刻度，摇匀，取适量溶液过0.45 μm滤膜后，供高效液相色谱仪分析；

2）色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C₁₈，150 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：乙腈-0.1%三氟乙酸溶液梯度洗脱；柱温：30 ℃；流速：0.6 mL/min；检测波长：280 nm；进样量：5 μL；

所述的梯度洗脱程序如下：

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2.根据权利要求1所述的一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，10 mg/mL标准储备溶液的制备方法如下：分别准确称取0.1000 g，精确至0.1 mg，糠氨酸、糠醛、5-羟甲基糠醛、2-乙酰呋喃、5-甲基糠醛标准品，用水充分溶解并定容至10 mL容量瓶中，配制成浓度为10 mg/mL的标准储备溶液；称取0.1000 g，精确至0.1mg呋喃酮，用甲醇充分溶解并定容至10 mL容量瓶中，配制成浓度为10 mg/mL的标准储备溶液，于4 ℃冷藏储存。

3.根据权利要求2所述的一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，100 μg/mL混合标准中间液的制备方法如下：分别准确移取100 μL上述各标准储备溶液，于10 mL容量瓶中，加水定容，配制成浓度为100 μg/mL混合标准中间液。

4.根据权利要求3所述的一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，标准工作溶液的制备方法如下：分别准确移取一定量的上述混合标准中间液，用水溶液溶解逐级稀释至0.2、0.4、0.8、2.0、4.0 μg/mL糠醛、5-羟甲基糠醛、2-乙酰呋喃、5-甲基糠醛，0.4、0.8、1.6、4.0、8.0 μg/mL呋喃酮，0.8、1.6、3.2、8.0、16 μg/mL糠氨酸的系列标准工作溶液，1℃～4℃冰箱避光保存，有效期3个月。

5.根据权利要求4所述的一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，该方法还包括将配制好的系列标准工作溶液依次进入液相色谱检测，以质量浓度作为横坐标（X），峰面积作为纵坐标(Y)进行线性回归，所得线性范围、线性方程、相关系数和定量限结果如下：

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6.根据权利要求1所述的一种同时测定婴幼儿辅食米面制品中6种美拉德反应产物的方法，其特征在于，该方法还包括采用分别在不含有美拉德反应产物的空白面粉样品中添加标准溶液的方法进行添加回收率和方法的精密度测定，糠氨酸的添加水平分别为1000、2000、10000 μg/100g，5-羟甲基糠醛,糠醛,呋喃甲基酮，甲基糠醛的添加水平分别为250，500，2500 μg/100g，呋喃酮的添加水平分别为500、1000、5000 μg/100g，平行测定6次，计算加标回收率及RSD；6种目标化合物的回收率范围为71.2% ~ 100%，RSD (n=6)范围为0.9% ~4.9%。