[发明专利]一种快速鉴别山茶品种的SSR标记引物、方法及应用

权利要求书

1.山茶品种SSR标记引物，其特征在于：3对引物均为自主开发引物，所述引物具体如下：

引物编号：SSR525，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，重复单元：(CAA)6；

引物编号：SSR530，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，重复单元：(ACA)6；

引物编号：SSR627，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，重复单元：(CGG)7。

2.一种鉴定山茶品种的方法，其特征在于：使用SSRseq^TM技术对山茶品种进行快速鉴别，鉴别方法具体如下：

DNA提取：使用DNA提取试剂盒提取山茶品种新鲜叶片中的DNA；

DNA质量评估：用琼脂糖凝胶电泳检查核酸的完整性，条带应清晰，无核酸降解和核酸污染，使用分光光度计评估脱氧核糖核酸纯度，DNA浓度≥20ng/μL，含量≥(200+nⅹ30)ng(n为检测数)；

PCR扩增：用SSR525、SSR530和SSR627引物位点对10个山茶品种进行单一或多重PCR反应扩增；

高通量测序：将所有PCR产物汇集，并制备文库，在IlluminaHiSeq2500(PE150bp)平台上测序，对原始读数经过一系列分析，包括使用FastQC的质量控制、用FLASH对reads进行合并，使用Blastn构建参考比对；

SSR基因分型：通过比对reads和序列数据计算SSR等位基因的数量，两步校正后列出了SSR基序和重复数，包括滑移调整和扩增效率调整；

山茶品种鉴别：根据同一引物不同山茶品种的SSR基因分型不同，即可有效鉴别不同品种。

3.根据权利要求1所述的山茶SSR标记引物在快速鉴别山茶品种中的应用。