[发明专利]一种A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原制备方法

说明书

本发明公开了一种A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原制备方法。本发明提供了SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：提高流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原在真核宿主细胞中的分泌表达产量或分泌表达效率；制备流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原分泌蛋白制品。本发明采用人工信号肽SP1引导流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA真核细胞分泌表达，效果显著优于天然信号肽Ha和白蛋白信号肽Al，本发明技术方案更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原制备方法。

背景技术

流感病毒属于正粘病毒科，包括人流感病毒和动物流感病毒。其中，人流感病毒分为甲(A)、乙(B)和丙(C)三个型别，是主要的流行性感冒(流感)的病原体。甲型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行；乙型流感病毒对人类致病也具有很强致病性，但是还没有发现乙型流感病毒引起过世界性大流行；丙型流感病毒只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，症状较轻。

自西班牙大流感以来，流感一直是人类最强劲的对手之一，作为一种RNA病毒，流感病毒虽然结构简单，但其变异性和传播性强。因此，世界卫生组织(WHO)每年上、下半年会分别公布下一季的北半球和南半球流感疫苗组分。

A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09毒株为WHO发布的2022-2023鸡胚培养流感病毒疫苗组分，研究其真核细胞分泌表达将助力疫苗相关研发或检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原(简称HA抗原)制备方法。

本发明发现信号肽(信号肽SP1，SEQ ID No.1)可引导流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量和分泌表达效率显著高于HA蛋白天然信号肽(信号肽Ha)和白蛋白信号肽(信号肽Al)。

第一方面，本发明要求保护SEQ ID No.1所示多肽(即为实施例中的SP1信号肽)或其相关生物材料在如下任一中的应用：

P1、提高流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原在宿主细胞中的分泌表达产量；

P2、提高流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原在宿主细胞中的分泌表达效率；

P3、制备流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09 HA抗原分泌蛋白制品。

所述相关生物材料为SEQ ID No.1所示多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。

在本发明的具体实施方式中，所述重组载体为将SEQ ID No.7所示DNA片段(SEQID No.7的第13-69位为信号肽SP1的编码基因，即SEQ ID No.2)插入到pCGS3载体的多克隆位点(如Hind III和Pac I)后得到的重组质粒。

进一步地，所述宿主细胞可为真核宿主细胞。如：HEK293细胞，CHO细胞，酵母细胞和昆虫细胞等。

在本发明的具体实施方式中，所述宿主细胞具体为Expi293F细胞。

进一步地，所述编码基因可为如下任一：

(a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；