[发明专利]一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用

权利要求书

1.一种冻存保护剂，其特征在于，其包括平衡液和冻存液；

所述平衡液由以下组分组成，组分的终浓度如下：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液；

所述冻存液由以下组分组成，组分的终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。

2.冻存保护剂，其特征在于，其包括平衡液和冻存液；

所述平衡液由以下组分组成，组分的终浓度如下：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液；

所述冻存液由以下组分组成，组分的终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。

3. 根据权利要求1或2所述的冻存保护剂，其特征在于，所述冻存保护剂还包括消化液，所述消化液包括的组分及其终浓度如下：1U/mL～10U/mL透明质酸酶，2.5U/mL～250U/mL胶原酶，10 U/mL～100U/mL分散酶，5mM～300 mM蔗糖，0.50%～5%甘油，2.5mM～25 mM肌酸，2.5 mM～25 mM异亮氨酸，25 mM～250 mM甘露醇。

4.一种用于胎盘组织和/或其有核细胞的试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求1~3任一项所述的冻存保护剂。

5.一种胎盘组织或其有核细胞的冻存方法，其特征在于，其包括：采用权利要求1~3任一项所述的冻存保护剂对胎盘组织块或其有核细胞进行冻存：将胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞置于冻存液中降温保存；或，将胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞置于平衡液中静置后，再置于冻存液中降温保存。

6.根据权利要求5所述的胎盘组织或其有核细胞的冻存方法，其特征在于，在所述平衡液中静置的条件包括：室温放置30~50min，0~8℃放置1~20min；

所述冻存液和/或平衡液的体积为胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞体积的0.5~2倍。

7.根据权利要求5或6所述的胎盘组织或其有核细胞的冻存方法，其特征在于，消化胎盘组织的有核细胞的消化液为权利要求3中所述的消化液。

8.一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法，其特征在于，其包括：采用权利要求5~7任一项所述的冻存方法对胎盘组织块和/或其有核细胞进行冻存，并对冻存后的胎盘组织块和/或其有核细胞进行复苏。

9.根据权利要求8所述的胎盘组织的细胞组织库的构建方法，其特征在于，对冻存后的胎盘组织块的复苏的步骤包括：将冻存的胎盘组织块解冻溶解，离心去除上清；在离心后的产物中添加0.5~2倍体积的权利要求1中所述的平衡液，放置10~40min后，添加0.5~2倍体积的平衡液和完全培养基的混合物，放置10~40min；添加完全培养基洗涤，离心去上清后，对胎盘组织块中的细胞进行培养，扩增获得细胞；

对冻存后的胎盘组织块的有核细胞的复苏的步骤包括：将冻存的胎盘组织块的有核细胞解冻溶解，离心去除上清；在离心后的产物中添加0.5~2倍体积的权利要求1中所述的平衡液，放置10~40min，离心后添加0.5~2倍体积的平衡液和完全培养基的混合物，放置10~40min；添加完全培养基洗涤，离心去上清后，对有核细胞进行培养，扩增获得细胞。

10.根据权利要求9所述的胎盘组织的细胞组织库的构建方法，其特征在于，所述混合物中，平衡液和完全培养基的体积比为（0.5~1.5）：1。