[发明专利]加帽聚核苷酸、加帽mRNA及组合物、药物蛋白及制备方法和应用、药物制剂

说明书

本申请实施例提供一种加帽聚核苷酸、加帽mRNA及组合物、药物蛋白及制备方法和应用、药物制剂，涉及基因工程技术领域。本申请实施例中的加帽聚核苷酸，至少一个五碳糖和相邻的磷酸之间是通过碳碳双键连接的，这种加帽聚核苷酸在制备加帽mRNA时，能使得制得的加帽mRNA更加稳定，翻译活性更好，分解率更低，同时也有利于提升加帽率。

技术领域

本申请涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种加帽聚核苷酸、加帽mRNA及组合物、药物蛋白及制备方法和应用、药物制剂。

背景技术

信使RNA(Messenger RNA，mRNA)是基因组中携带蛋白质编码信息的单链多核苷酸链，可作为药物、疫苗等使用；目前可以使用体外转录(In Vi tro Transcription，IVT)方法在体外合成mRNA。在合成mRNA后，需要对mRNA的5'进行修饰，这种修饰结构一般被称为帽状结构。帽状结构可以防止mRNA在5'端发生降解、同时也能起到帮助mRNA穿过核膜的选择性孔道而进入细胞质、增强翻译、帮助完成全部剪切过程等作用。

现有的帽状结构一般是以N7甲基鸟苷(M7G)为基础，通过5',5'-三磷酸桥(m7GpppN)与RNA相连，这种帽状结构的结构被称为Cap 0，但是Cap0结构的加帽率不高，而且加帽后的mRNA稳定性也较差，在生物体内的降解率也较高；使用含有这种帽结构的mRNA进行蛋白质的翻译时，翻译活性较低。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种加帽聚核苷酸、加帽mRNA及组合物、药物蛋白及制备方法和应用、药物制剂，能增强加帽mRNA的稳定性和加帽率，降低加帽mRNA在生物体内的降解率，提高加帽mRNA的翻译活性。

第一方面，本申请实施例提供了一种加帽聚核苷酸，其为以下结构通式的化合物，或为以下结构通式的化合物的盐形式：

E₁至E₅中的每一个均为碳，Z₁至Z₅中的每一个独立地为碳或氧，且E₁和Z₁之间、E₂和Z₂之间、E₃和Z₃之间、E₄和Z₄之间、E₅和Z₅之间至少一处为碳碳双键；B₁至B₄中的每一个独立地为核苷碱基；m₁、m₂分别为0或1；n₁为1，且n₂、n₃中的每一个独立地为0～20中的任一整数；G₁、G₂分别为氢或甲基；R₁至R₆中的每一个独立地为氢、羟基、烷基、烷氧基、卤素中的任一种；X₁至X₆中的每一个独立地为氧、硫、＝NH、＝NCH₃中的任一种；Y₁至Y₆中的每一个独立地为羟基、巯基、硒、芳基、烷基、烷氧基、芳氧基、-BH₃、-NH₂、-NHCH₃、-NH(C(＝O)CH₃)中的任一种；Q₁、Q₂分别为氧、硫、亚甲基中的任一种。

在上述技术方案中，发明人发现，由于上述结构通式的加帽聚核苷酸在E₁和Z₁之间、E₂和Z₂之间，直至E₅和Z₅之间至少一处存在碳碳双键，当用上述加帽聚核苷酸给mRNA片段的5'加帽时，就能明显地改善mRNA片段的稳定性和加帽率，降低加帽后的mRNA片段在生物体中的降解率，同时后续使用含有该加帽聚核苷酸的mRNA片段翻译蛋白质时，翻译活性也较高。