[发明专利]发酵制备3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的方法及该方法的应用

说明书

本发明属于生物医药及保健食品技术领域，具体涉及发酵制备3,5‑二羟基‑4‑甲氧基苄醇的方法及该方法的应用。用不含有3,5‑二羟基‑4‑甲氧基苄醇的生牡蛎肉，经匀浆、灭菌、降温处理后，向无菌牡蛎匀浆液中接种牡蛎肉重量的0.01％‑2.0％的乳酸菌和/或酵母菌，经升温，在31℃～45℃条件下发酵6～72h，得到含有3,5‑二羟基‑4‑甲氧基苄醇的混合液。本发明通过研究发现原本不含有3,5‑二羟基‑4‑甲氧基苄醇的牡蛎肉，通过单独或联合添加乳酸菌、酵母菌发酵后通过高温蒸煮及喷雾干燥获得含有3,5‑二羟基‑4‑甲氧基苄醇的牡蛎肽粉，能够应用于工业化规模生产。

技术领域：

本发明属于生物医药及保健食品技术领域，具体涉及一种发酵制备3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的方法及该方法的应用。

背景技术：

研究表明3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)在清除第一个自由基后可以有效地再生，抗氧化作用的能力也相应增强，通过抗氧化作用能起到缓解疲劳的作用；在抗肥胖研究过程中，3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)单独使用或与运动联合使用可以通过刺激肌肉脂肪酸的利用和线粒体能量的产生而减轻肥胖的发生；它还具有抗糖尿病、抗炎活性，含3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)的牡蛎肽粉可以显著下调炎症因子的表达，使胰岛素抵抗指数下降63％。3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)还能有效改善DNA、蛋白质和脂质的氧化还原状态，保护肝细胞免受氧化应激，且没有任何细胞毒性。这些发现表明3,5-二羟基-4-甲氧基苯甲醇(DHMBA)是一种潜在的治疗与活性氧簇相关的疾病及非酒精性脂肪性肝炎的天然多酚类物质。

专利申请号为2014800813999的中国专利《从牡蛎肉生成3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的生成方法》(公开号CN106659213A)首次提到了利用牡蛎肉处理得到3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇，而该方法是将牡蛎肉直接在98℃以上的温度加热处理，或者加压后在90℃以上加热处理，并没有提及发酵可以产生3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的内容。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是传统热处理温度较高或需要辅助高压，并没有提及发酵可以产生3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的内容。

为解决上述问题，本发明通过研究发现原本不含有3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的牡蛎肉，通过单独或联合添加乳酸菌、酵母菌发酵后的牡蛎发酵液中含有较高含量的3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇，能够应用于工业化规模生产。

为达到以上目的，本发明具体通过以下技术方案实现：发酵制备3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的方法，使用不含有3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的生牡蛎肉，经匀浆、灭菌处理后，待无菌牡蛎匀浆液降温，优选降温至15℃后，向无菌牡蛎匀浆液中接种牡蛎肉重量的0.01％-2.0％的乳酸菌和/或酵母菌，经升温，在31℃～45℃条件下发酵6～72h，得到含浓度为150μg/kg以上的3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的混合液，该混合液经离心分离后可得到含有3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的牡蛎肽粉。

进一步的，所述无菌牡蛎匀浆液的制备方法为将本身并不含有3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的牡蛎肉匀浆液在121℃的条件下灭菌10-20min。

进一步的，所述乳酸菌的添加量为0.01％-1.99％，酵母菌的添加量为0.01％-1％。实际生产过程中发现，0.01％-1％的乳酸菌即可以起到促进DHMBA生成的作用，过量添加反而会抑制DHMBA的生成。

进一步的，上述发酵后的混合液经升温后高温蒸煮，得到3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇。通过实验数据分析可知，加热可以使原本不含有DHMBA的牡蛎肉产生DHMBA，且加热可以与发酵产生叠加作用，更大程度上促进DHMBA的生成。

进一步的，所述高温蒸煮温度为90℃及以上高温，蒸煮6h及以上。在实验过程中发现，较低的温度和更短的时间对DHMBA未产生明显的促进作用，因此将温度与时间确定为温度为90℃及以上高温，蒸煮6h及以上。