[发明专利]一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法在审
| 申请号： | 202310092773.6 | 申请日： | 2023-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN116286999A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 禾立春;王欢;王冠;赵小玲;刘买利 | 申请（专利权）人： | 中国科学院精密测量科学与技术创新研究院;湖北光谷实验室 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87;C12N15/70 |
| 代理公司： | 武汉市首臻知识产权代理有限公司 42229 | 代理人： | 高琴 |
| 地址： | 430077 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 细菌 外膜囊泡 蛋白质 递送 方法 | ||
1.一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤一、制备含目的蛋白的分泌表达型质粒，并将其导入细菌中培养；
步骤二、IPTG诱导表达，使目的蛋白包裹进入细菌外膜囊泡；
步骤三、细菌外膜囊泡与细胞共培养，将包裹的目的蛋白递送进胞质。
2.根据权利要求1所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述步骤一中，制备含目的蛋白的分泌表达型质粒包括：采用基因工程方法在目的蛋白的DNA序列前插入分泌型信号序列，构建到表达载体上，得到含目的蛋白的分泌表达型质粒。
3.根据权利要求1所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述步骤二，诱导温度为35-38℃。
4.根据权利要求1所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述步骤二，诱导表达时间为5-40 h。
5.根据权利要求1所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述方法还包括利用小分子对包裹于囊泡中的目的蛋白直接进行偶联修饰，该步骤位于步骤二之后、步骤三之前。
6.根据权利要求5所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述利用小分子对包裹于囊泡中的目的蛋白直接进行偶联修饰包括以下步骤：
S1、向包裹目的蛋白后的细菌外膜囊泡中加入小分子后孵育一段时间，得到混合体系；
S2、用PBS对混合体系进行透析，以除去游离的未偶联的小分子。
7.根据权利要求6所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述步骤S1，孵育温度为0-15℃。
8.根据权利要求1所述的一种基于细菌外膜囊泡的蛋白质递送的方法，其特征在于，所述目的蛋白为用于基础研究或具有治疗作用的蛋白、肽或抗原。
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