[发明专利]一种Ptrf基因增强子及其在调控脂肪沉积中的应用

权利要求书

1.鼠Ptrf基因增强子，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.扩增权利要求1所述的鼠Ptrf基因增强子的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

3.扩增权利要求1所述的鼠Ptrf基因增强子的方法，其特征在于，以鼠基因组DNA为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物对进行PCR扩增，得到SEQ ID No.1所示的鼠Ptrf基因增强子。

4.一种生物材料，含有权利要求1所述的鼠Ptrf基因增强子，所述生物材料为重组DNA、载体或工程菌。

5.权利要求1所述的鼠Ptrf基因增强子或权利要求4所述的生物材料在增强鼠Ptrf基因启动子转录活性上的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述基因为鼠Ptrf基因。

7.一种鼠Ptrf基因增强子表达抑制的动物模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)设计靶向鼠Ptrf基因增强子的sgRNA，并将该sgRNA对应的DNA序列连接到CRISPR/dCas9-KRAB慢病毒载体上，所述鼠Ptrf基因增强子的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

(2)将步骤(1)得到的慢病毒载体在293FT细胞中进行包装，收集慢病毒液；

(3)将步骤(2)得到的慢病毒液进行超滤浓缩，得到慢病毒浓缩液；

(4)用步骤(3)得到的慢病毒浓缩液感染小鼠腹股沟脂肪组织，得到鼠Ptrf基因增强子表达抑制的小鼠模型。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，sgRNA对应的DNA序列如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5所示。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，超滤浓缩的方法为：将慢病毒液转移到超滤管，4℃，15000r/min离心30min，浓缩至1mL体积。