[发明专利]一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器及其制备方法

说明书

本发明属于电化学传感器技术领域，公开了一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器及其制备方法。将捕获探针通过金硫自组装固定到金电极表面，用MCH封闭后，得到有捕获探针修饰的金电极。然后通过捕获探针与S100B蛋白特异性结合修饰检测物S100B蛋白，最后通过在水中由于亲疏水作用发生自组装的信号放大探针与S100B蛋白特异性结合，即得到检测S100B蛋白的电化学生物传感器。本发明基于多肽中的序列KRLRRSAHARKETEFLRLKRTRLGLE与S100B蛋白之间的2：1的特异性识别构建了一种检测S100B蛋白的电化学生物传感器，采用CV和SWV对传感器的性能和特性进行表征，准确捕捉电化学信号的变化。该传感器具有灵敏度高、特异性强、分析速度快等特点。

技术领域

本发明属于电化学传感器技术领域，具体涉及一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器及其制备方法。

背景技术

S100B蛋白是一种21kDa二聚体蛋白，黑色素瘤的标志物中，乳酸脱氢酶是临床常规使用效果的最突出的标志物，而S100B蛋白效果甚至优于乳酸脱氢酶。因此，S100B蛋白作为一种新的标志物，在黑素瘤的早期检测和预防中起着至关重要的作用。目前检测S100B蛋白的主要方法有：酶联免疫吸附试验(ELISA)和使用抗体的免疫组织化学，酶联免疫吸附法特异性和灵敏性较差，操作过程繁琐，检测时间较长；使用抗体的免疫组织化学灵敏性差，抗原质量要求高，很难获得各种市售抗原抗体。这里我们建议使用多肽作为抗体的简化等价物，用电化学而不是光谱学测量。一方面，众所周知，电化学技术简单、快速且具有成本效益。另一方面，多肽的几个优点，如合成可接近性和易于修饰，使它们成为蛋白质测定的靶向配体的一个令人信服的选择。目前，利用多肽和电化学结合的方法还未见相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器及其制备方法。能对S100B蛋白进行即时检测，灵敏度高、特异性强且简单廉价。为达到上述目的，本发明采取如下技术手段：

本发明提供一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学生物传感器的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备S100B蛋白溶液：

将S100B蛋白冻干粉溶于含三(2-氯乙基)磷酸酯TCEP的Tris-HCl溶液中，得到S100B蛋白溶液；

(2)制备捕获探针溶液：

将捕获探针多肽A冻干粉溶于含TCEP的去离子水中，得到捕获探针溶液；

(3)制备信号放大探针溶液：

将信号放大探针多肽B冻干粉溶于去离子水中，经过自组装后得到信号放大探针溶液；

(4)电化学生物传感器的组装：

步骤4.1，将预处理后的金电极放入步骤(2)所得的捕获探针溶液中进行自组装修饰，然后用乙醇和水清洗；

步骤4.2，将步骤4.1中修饰和清洗完的金电极放入6-巯基-1-己醇MCH溶液中，封闭电极表面未被捕获探针占据的空白位点，封闭后用乙醇和去离子水冲洗电极表面；

步骤4.3，将步骤4.2中处理完的金电极放入步骤(1)所得的S100B蛋白溶液中，通过金电极表面已修饰上的捕获探针与S100B蛋白的特异性结合，得到修饰上S100B蛋白的金电极表面；

步骤4.4，将步骤4.3中修饰上S100B蛋白的金电极放入步骤(3)所得的信号放大探针溶液中，通过S100B蛋白与信号放大探针之间的特异性结合，形成多肽-蛋白-多肽的“三明治”夹心结构，即为检测S100B蛋白的电化学生物传感器。

进一步地，