[发明专利]一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测黑色素瘤标志物S100B蛋白的电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备S100B蛋白溶液：

将S100B蛋白冻干粉溶于含三(2-氯乙基)磷酸酯TCEP的Tris-HCl溶液中，得到S100B蛋白溶液；

(2)制备捕获探针溶液：

将捕获探针多肽A冻干粉溶于含TCEP的去离子水中，得到捕获探针溶液；

(3)制备信号放大探针溶液：

将信号放大探针多肽B冻干粉溶于去离子水中，经过自组装后得到信号放大探针溶液；

(4)电化学生物传感器的组装：

步骤4.1，将预处理后的金电极放入步骤(2)所得的捕获探针溶液中进行自组装修饰，然后用乙醇和水清洗；

步骤4.2，将步骤4.1中修饰和清洗完的金电极放入6-巯基-1-己醇MCH溶液中，封闭电极表面未被捕获探针占据的空白位点，封闭后用乙醇和去离子水冲洗电极表面；

步骤4.3，将步骤4.2中处理完的金电极放入步骤(1)所得的S100B蛋白溶液中，通过金电极表面已修饰上的捕获探针与S100B蛋白的特异性结合，得到修饰上S100B蛋白的金电极表面；

步骤4.4，将步骤4.3中修饰上S100B蛋白的金电极放入步骤(3)所得的信号放大探针溶液中，通过S100B蛋白与信号放大探针之间的特异性结合，形成多肽-蛋白-多肽的“三明治”夹心结构，即为检测S100B蛋白的电化学生物传感器。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，含三(2-氯乙基)磷酸酯TCEP的Tris-HCl溶液中，TCEP的浓度为1mM；Tris-HCl的浓度为20mM；S100B蛋白溶液的浓度为0.2nM-12.8nM。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，含TCEP的去离子水中，TCEP的浓度为1mM；捕获探针溶液的浓度为30μM；多肽A的氨基酸序列为：CP₄-KRLRRSAHARKETEFLRLKRTRLGLE。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，信号放大探针溶液的浓度为30μM；多肽B的氨基酸体序列为：C₁₆-GGG-KRLRRSAHARKETEFLRLKRTRLGLE-Fc。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤4.1中，自组装修饰的条件为：在黑暗环境中于4度环境下反应12-16h。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤4.2中，MCH溶液的浓度为1mM，封闭时间为0.5-1h。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤4.3中，S100B蛋白的修饰时间至少2.5h；步骤4.4中，信号放大探针的修饰时间为2h。

8.将权利要求1-7任一项所述制备方法制得的电化学传感器用于检测黑色素瘤标志物S100B蛋白用途。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于：检测步骤为：

以检测S100B蛋白的电化学生物传感器为工作电极，Ag/AgCl参比电极，铂丝作为对电极；将工作电极放入PBS电解液的电解杯中，用方波伏安法进行电化学测试，通过电化学信号状态表征S100B蛋白浓度。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于：所述方波伏安法的参数为：扫描电压从0.2V～0.8V，电位增量5mV，振幅25mV；PBS电解液中还添加有NaClO₄，NaClO₄的浓度为0.1M。