[发明专利]免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法应用

权利要求书

1.一种免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：称取试样于离心管中，加入甲醇、水配置的水溶液，混匀、离心，取上清液备用；

S2：取氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钾，用水溶解，用盐酸调节pH值，加水稀释，加入吐温-20磷酸盐溶解，获得缓冲溶液；

S3：取出免疫亲和柱，去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上步骤S1的上清液；

S4：上样结束后，用水淋洗亲和柱，去除柱内残留液，用含有荧光剂的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液用滤膜过滤后供液相色谱-质谱分析；

S5：如果试样中的荧光剂质量色谱峰的保留时间与标准工作溶液一致，样品中荧光剂化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，则可判断样品中存在荧光剂。

2.根据权利要求1所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S1中，试样为1g，甲醇与水的配比为6：4；甲醇与水的水溶液为50mL。

3.根据权利要求1所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S2中氯化钠为10g、磷酸氢二钠1.3g、磷酸二氢钾为0.3g、氯化钾为0.3g，水为1000mL，调节pH值为7.6；吐温-20磷酸盐为12mL。

4.根据权利要求1所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S4中淋洗亲和柱的水为10mL，甲醇溶液的乙酸含量为1％，甲醇溶液为15mL。

5.根据权利要求1所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S4中液相色谱-质谱分析的色谱柱：WATERSACQUITYUPLCHSST3；柱温：45℃；样品室温度：12℃；进样体积：8μL；流速：0.4mL/min；流动相：A为乙腈、B为水，梯度洗脱程序：2～4min，A由35％线性升到75％，7～8min，A相保持75％，10～12min，A由75％线性降到35％，10～15min，A相保持35％。

6.根据权利要求5所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述色谱柱WATERSACQUITYUPLCHSST3为：100mm×2.1mm，1.8μm。

7.根据权利要求5所述的免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：液相色谱-质谱分析的条件：离子源温度550℃，喷雾电压6500V，气帘气30psi，喷雾气50psi，辅助加热气65psi，去簇电压70V；化合物参数：母离子332.2，定量离子265，碰撞能量20V，定性离子231碰撞能量48V。

8.一种如权利要求1所述免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法的应用，其特征在于：用于检测确证试样物中是否含有荧光剂。