[发明专利]岩原鲤不同家系的鉴定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定岩原鲤的PCR引物，其特征在于：所述用于鉴定岩原鲤的PCR引物是岩原鲤双重PCR引物，所述岩原鲤双重PCR引物是5组，每组岩原鲤双重PCR引物分别包括两对引物序列；

所述岩原鲤双重PCR引物分别是：

第I组，包括YYL1引物对以及YYL2引物对；其中：YYL1的正向引物F是CGAGTGCGATTGCTG，反向引物R是GCGTCATAGGATGTAGTTT；YYL2的正向引物F是GCGTTACAATCACCT，反向引物R是TGTCTGTTCTCGCTCT；

第II组，包括YYL3引物对以及YYL4引物对；其中：YYL3的正向引物F是CGGCGTGATAACAATACAA，反向引物R是AATGCCAGTGAAGACCG；YYL4的正向引物F是GAGTCTTTGCTGATAAA，反向引物R是GAATTGTTGGCTTGG；

第III组，包括YYL5引物对以及YYL6引物对；其中：YYL5的正向引物F是CCTTATTACTCGCACG，反向引物R是AGCCATCAATACATCC；YYL6的正向引物F是GAACAAAGGAAAGCG，反向引物R是TGGGTGAATCAAAGA；

第IV组，包括YYL7引物对以及YYL8引物对；其中YYL7的正向引物F是TCCAAGACTGAATAT，反向引物R是AGTGCTTTGACTACAA；YYL8的正向引物F是GCATGTTGCTAGGATA，反向引物R是AGGCTTGCTGATAGG；

第V组，包括YYL9引物对以及YYL10引物对；其中：YYL9的正向引物F是GCTTCCTGCCTACAT，反向引物R是TATTCATCCTGGTCTC；YYL10的正向引物F是ATACTGTGGTTGACGG，反向引物R是TCACGCTATCTTATCAT。

2.如权利要求1所述的用于鉴定岩原鲤的PCR引物在鉴定岩原鲤时的应用。

3.如权利要求1所述的用于鉴定岩原鲤的PCR引物在鉴定区分岩原鲤不同家系时的应用。

4.一种基于如权利要求1所述的用于鉴定岩原鲤的PCR引物对岩原鲤不同家系的鉴定方法，其特征在于：所述鉴定方法包括以下步骤：

1）获取待鉴别的岩原鲤鳍条，从岩原鲤鳍条中提取岩原鲤DNA，所述待鉴别的岩原鲤至少是两个家系，每个家系至少包括两尾岩原鲤；

2）以步骤1）得到的岩原鲤DNA为模板，采用如权利要求1所述的用于鉴定岩原鲤的PCR引物进行PCR扩增，得到扩增产物；

3）对步骤2）得到的扩增产物使用聚丙烯酰胺胶进行电泳和银染；

4）将步骤3）中银染结果通过遗传分析软件进行分析，测量待鉴别的所有待鉴别的岩原鲤中每个个体之间的遗传距离，根据遗传距离绘制UPGMA聚类分析图，根据UPGMA聚类分析图所示的结果将待鉴别的岩原鲤的家系进行区分鉴定。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤2）中PCR扩增的反应体系是15ul，其中：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/L dNTP 0.5ul，2.0 mmol/L MgCl₂ 1.5ul，用于鉴定岩原鲤的PCR引物的正向引物F以及反向引物R各0.5ul，5 U/μL Taq酶0.5ul，DNA模板2ul，超纯水7ul。

6.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤2）中PCR扩增的反应程序是：94℃预变性3分钟；然后94℃变性30秒，56℃退火30秒，72℃延伸45秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟，4℃保存。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤3）的具体实现方式是：对步骤2）得到的扩增产物使用12%的聚丙烯酰胺胶进行电泳和银染。

8.根据权利要求4-7任一项所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤4）中的遗传分析软件是MEGA软件。