[发明专利]miR-320a-3p作为内参基因在法医体液鉴定中的应用

说明书

本发明公开了miR‑320a‑3p作为内参基因在法医体液鉴定中的应用。miR‑320a‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。实验证明，miR‑320a‑3p是外周血、月经血、唾液、精液和阴道分泌液中表达最稳定的内参基因，其与RNU6b的组合增强了归一化效力。本发明通过确定合适的内参基因以进行严格的归一化，可以促进基于miRNA的体液鉴定的发展和应用，能够为后续相关研究在内参基因的选择上提供有价值的信息。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于法医学领域，具体涉及miR-320a-3p作为内参基因在法医体液鉴定中的应用。

背景技术

基于miRNA的体液鉴定方法在法医学实践中发挥着重要作用，在使用相对定量法检测目标miRNA表达量时，需要科学准确地选择内参基因。微RNA(microRNA，miRNA)是一种长度为18-25个核苷酸的非编码小分子RNA。miRNA具有稳定性高、保守性强、灵敏度高、组织特异性好、可兼容DNA同步分析等优点，已成为法医学体液鉴定的重要替代工具。

定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR，RT-qPCR)被广泛用于确定候选基因的表达水平，通常被认为是基因表达定量的金标准。然而，为了提供可靠的、可重复的、具有生物学意义的目标分子数量，RT-qPCR必须对非生物学差异进行稳健和严格的归一化；尤其是在大多数法医环境中，为了抵消从不同个体、体液类型和时间进程中所获得样本的明显的非生物学差异，使用合适的和经过验证的内源性参照基因尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供更稳定的用于法医体液鉴定的内参基因。

本发明首先保护miR-320a-3p，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明还保护所述miR-320a-3p作为内参基因在鉴定人体液的组织来源中的应用。

上述应用中，所述人体液的组织来源可为外周血、月经血、唾液、精液或阴道分泌液。

上述应用中，所述应用用于非疾病的诊断与治疗。

本发明还保护内参基因组合，其由miR-320a-3p和RNU6b组成；

miR-320a-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

RNU6b的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明还保护所述内参基因组合在鉴定人体液的组织来源中的应用。

上述应用中，所述人体液的组织来源可为外周血、月经血、唾液、精液或阴道分泌液。

上述应用中，所述应用用于非疾病的诊断与治疗。

本发明以五种法医常见体液(即精液、外周血、月经血、唾液、阴道分泌液)为研究对象，通过对37个样本的高通量测序和分析筛选出28个候选内参基因，并通过RT-qPCR检测其在15份样本中表达水平。通过RefFinder综合4种常用算法(geNorm、NormFinder、BestKeeper和ΔCq方法)，对一组10个相对稳定的候选内参基因在100份样本中的稳定性进行评价。此外，制备室外和室内放置不同时间的模拟降解样本共56份以进一步评价候选内参基因在不同条件下的稳定性。最后，检测目前已有的体液特异性miRNA在30份样本中的相对表达量，以验证内参基因的实用性和有效性。经4种算法稳定性综合排序，miR-320a-3p是五种法医相关体液中表达最稳定的内参基因，其与RNU6b的组合增强了归一化效力。当检测体液特异性miRNA时，miR-320a-3p与RNU6b具有相似的归一化效果。本研究通过确定合适的内参基因以进行严格的归一化，可以促进基于miRNA的体液鉴定的发展和应用。本研究是目前为止对于miRNA体液鉴定中内参基因进行的最为系统性的研究，能够为后续相关研究在内参基因的选择上提供有价值的信息。本发明具有重要的应用价值。