[发明专利]多能干细胞衍生内皮细胞外泌体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将人诱导多能干细胞hiPSCs分化为内皮细胞ECs，再通过流式细胞术细胞分选收集同时表达血小板-内皮细胞粘附分子CD31和血管内皮钙粘蛋白CD144的细胞，获得纯化的hiPSC-ECs；

将hiPSC-ECs在无血清培养基中培养46～50小时后收集细胞上清，并将该收集的细胞上清于250～350g转速下离心8～12分钟后去除残存的细胞；

收集上清于1500～2500g转速条件下离心8～12分钟去除死细胞；

收集上清于8000～12000g转速条件下离心25～35分钟去除细胞碎片；

收集上清于95000～105000g转速条件下离心1.8～2.5小时后弃去上清，所得沉淀即为多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将人诱导多能干细胞hiPSCs分化为内皮细胞ECs的步骤包括：用含Y27632 mTeSR的培养基传代hiPSCs，再用含CHIR99021、骨形态发生蛋白4和B27的培养基诱导分化，然后用含血管内皮生长因子和forskolin Stem-Pro34的培养基处理hiPSCs，可将hiPSCs分化为ECs。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述获得纯化的hiPSC-ECs，在无血清培养基中维持。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多能干细胞衍生内皮细胞外泌体沉淀，用PBS重悬后于-80℃保存或用于实验。

5.一种由权利要求1所述制备方法制得的多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo。

6.多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo在制备治疗或预防缺血性心脏病的干细胞衍生产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述缺血性心脏病包括：心绞痛、心肌梗死、缺血性心肌病、无症状性的心肌缺血。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hiPSC-EC-Exo可通过直接心肌注射给药。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hiPSC-EC-Exo通过增加心肌细胞ATP和钙瞬变、减少乳酸脱氢酶的释放保护心肌细胞免受糖氧剥夺损伤。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hiPSC-EC-Exo通过维持心肌细胞的钙稳态，实现对缺血心肌的保护。