[发明专利]一种基于距离信号输出的DNA糖基化酶即时检测方法

权利要求书

1.一种纸分析器件，其特征在于，包括纸片A、纸片B和纸片C；所述纸片A、纸片B和纸片C均包括亲水区和疏水区，所述纸片C包括相连接的中转区和显色区，所述中转区和所述显色区底部设有密封底衬；纸片A的亲水区、纸片B的亲水区与纸片C的中转区在垂直位置上相对应设置，纸片C的显色区不被纸片A和纸片B遮挡；

所述纸片A的亲水区上负载功能化DNA水凝胶，所述纸片B的亲水区上负载颜色指示剂。

2.根据权利要求1所述的一种纸分析器件，其特征在于，所述功能化DNA水凝胶包括DNA糖基化酶可识别剪切的损伤碱基以及任意含有A，G，C，T的DNA链。

3.根据权利要求2所述的一种纸分析器件，其特征在于，所述DNA糖基化酶包括尿嘧啶DNA糖基化酶UDG或人单链选择性单功能尿嘧啶DNA糖基化酶hSMUG。

4.根据权利要求1所述的一种纸分析器件，其特征在于，所述颜色指示剂包括溴酚蓝、甲基橙、甲基红或紫色石蕊。

5.根据权利要求1所述的一种纸分析器件，其特征在于，所述亲水区被所述疏水区包围；所述纸片C也设有疏水区，纸片C的疏水区包围中转区和显色区；所述显色区为长方形，根据长方形内色柱的长度对0-50U/mL浓度范围内DNA糖基化酶进行定量检测。

6.一种基于距离信号输出的DNA糖基化酶即时检测方法，其特征在于，所述检测方法为非疾病的诊断方法，包括如下步骤：

(1)功能化DNA水凝胶负载于纸分析器件纸片A的亲水区；颜色指示剂负载于纸分析器件纸片B的亲水区；组装所述纸分析器件；

(2)将含有DNA糖基化酶的缓冲液滴加到纸分析器件纸片A的亲水区上，DNA糖基化酶使功能化DNA水凝胶瓦解，缓冲液由重力作用和毛细管作用通过纸片A到达纸片B的亲水区；缓冲液携带纸片B上的颜色指示剂由重力作用和毛细管作用达到纸片C的中转区，进而到达纸片C的显色区，产生不同距离的色柱，实现对DNA糖基化酶的可视化定量检测。

7.根据权利要求6所述的一种基于距离信号输出的DNA糖基化酶即时检测方法，其特征在于，所述功能化DNA水凝胶通过滚环扩增制备；所述滚环扩增的环状模板链是任意含有A，G，C，T的DNA链。

8.根据权利要求7所述的一种基于距离信号输出的DNA糖基化酶即时检测方法，其特征在于，功能化DNA水凝胶的功能化可通过在滚环扩增中使用除dNTPs外可被聚合酶利用的、待检测DNA糖基化酶可识别剪切的损伤碱基所对应的其他2'-脱氧核苷-5'-三磷酸三钠盐实现或滚环扩增制备出水凝胶后利用化学试剂处理使水凝胶上的碱基损伤成DNA糖基化酶可识别剪切的损伤碱基；所述dNTPs包括dATP、dTTP、dCTP或dGTP。

9.根据权利要求8所述的一种基于距离信号输出的DNA糖基化酶即时检测方法，其特征在于，所述对应的其他2'-脱氧核苷-5'-三磷酸三钠盐包括2'-脱氧尿苷-5'-三磷酸三钠盐dUTP。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，DNA糖基化酶使功能化DNA水凝胶瓦解的时间为60-120min，所述缓冲液中包含5-10U APE。