[发明专利]多靶标的群体感应淬灭酶制剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.多靶标的群体感应淬灭酶制剂，其特征在于，包括酰基高丝氨酸内酯酰基转移酶AiiO蛋白和3-羟基-4-氧代喹诺酮2，4-双加氧酶AqdC蛋白，两者的质量比为20：(1-25)。

2.如权利要求1所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂，其特征在于，还包括去铁酮，AiiO蛋白、AqdC蛋白和去铁酮的质量比为20：(1-25)：(0.695-2.78)。

3.如权利要求1或2所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂，其特征在于，所述AqdC蛋白由IPTG诱导表达制备而成，包括如下步骤：

将质粒pET28b(+)::his8-aqdC^I化学转化或电转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)，利用重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28b(+)::his8-aqdC^I对群体感应淬灭酶AqdC进行IPTG诱导表达，将重组工程菌1％接种至含有终浓度为50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃，180rpm条件下活化10h，活化后的菌液1％转接至含有终浓度为50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，37℃，180rpm条件下培养至菌体密度值OD₆₀₀达到0.6-0.8时，添加终浓度为0.2mM的IPTG诱导目的蛋白表达，16℃，180rpm条件下培养20-24h，进行目的蛋白的纯化。

4.如权利要求1或2所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂，其特征在于，所述AqdC蛋白还可以由乳糖自诱导方法制备而成，包括如下步骤：

将E.coli BL21(DE3)-pET28b(+)::his8-aqdC^I在含有终浓度为50μg/mL卡那霉素的10mL高密度增殖液体培养基中活化后，按3‰接种量转接至含有终浓度为50μg/mL卡那霉素的200mL乳糖自诱导培养基中，刻度为1L的挡板摇瓶中，乳糖自诱导培养基的装液量为200mL，37℃，180rpm条件下培养至菌体密度OD₆₀₀达到0.6-0.8，降温至20-25℃，250rpm条件下利用挡板摇瓶培养24h，进行目的蛋白的纯化。

5.多靶标的群体感应淬灭酶制剂的应用，其特征在于，用于抑制引起呼吸道感染及烧伤感染的、能合成AHL或能应答AHL后促进毒力和生物膜的铜绿假单胞菌共存革兰氏阴性菌群。

6.如权利要求5所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂的应用，其特征在于，用于抑制铜绿假单胞菌复杂群体感应系统及其所调控毒力因子和生物膜合成方面的应用。

7.如权利要求6所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂的应用，其特征在于，所述毒力因子的抑制具体操作为：铜绿假单胞菌于12孔板中培养8h后，向孔板中添加纯化的AqdC和AiiO蛋白溶液，每mL培养液中添加10-250μgAqdC蛋白与200μgAiiO蛋白进行联用，培养至24h。

8.如权利要求6所述的多靶标的群体感应淬灭酶制剂的应用，其特征在于，所述生物膜合成的抑制具体操作为：铜绿假单胞菌于12孔板中培养8h后，向孔板中添加纯化的AqdC和AiiO蛋白溶液以及去铁酮溶液，每mL培养液中添加10-250μgAqdC蛋白、200μgAiiO蛋白与50-200μM去铁酮溶液进行联用，培养至24h。