[发明专利]一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体及其应用，通过抗原免疫小鼠，筛选得到表达乙肝表面抗体的杂交瘤细胞株。所述单克隆抗体的重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示，其轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、KVS、SEQ ID NO.5所示；上述单克隆抗体可用于Western blot检测真核细胞来源的HBsAg、不同基因型的HBsAg和HBsAg突变体，适用于检测多种类型的样本，为乙肝病毒的检测及乙肝疾病的治疗开拓了新的方法。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体及其应用。

背景技术

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。鉴于单克隆抗体的以上特征，其已经迅速用于医学的众多领域，如作为检验医学实验室的诊断试剂，用于酶联免疫吸附试验、免疫组化、流式细胞术等技术，蛋白质纯化抑或肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。但单克隆抗体也存在局限性，如当用免疫印迹方法(Western blot)检测病毒蛋白时，识别病毒抗原的抗体往往识别的是抗原上的构象表位，因此单克隆抗体难以应用于Western Blot检测。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)引起的急性和慢性感染是严重危害人类健康的全球性的公共卫生问题。随着乙肝疫苗的接种，极大的控制了病毒蔓延。但我国仍是世界上乙型肝炎患者最多的国家。目前临床中用于治疗慢乙肝的药物，包括干扰素和核苷/核苷酸类似物，虽然可以有效抑制HBV复制，但无法彻底清除病毒，并可能出现耐药性。

乙肝表面抗原-HBsAg，不仅作为HBV的包膜蛋白参与完整病毒颗粒的行程，还会和宿主脂质组成非感染性亚病毒颗粒，即HBsAg颗粒，有大、中、小三种形式。其中小HBsAg由226个氨基酸编码，是引起机体产生保护性抗体的主要组成部分，其中有一个免疫优势区称为“a”抗原决定簇，位于124位-147位氨基酸。HBsAg上有4个跨膜区，“a”抗原决定簇位于跨膜区2和跨膜区3之间暴露于病毒颗粒表面，是现有HBsAg相关抗体主要选择的免疫性反应片段。由于HBV慢性感染过程中，经过自然选择、适者生存的时间和空间压力，会出现一系列的突变株，而上述“a”抗原决定簇是HBsAg发生突变频率较高的区域。因此针对该区域的HBsAg抗体能否与发生突变的HBsAg结合，是否能涵盖所有类型的突变，都存在问题。

当前对HBV的科研研究和临床检测中，HBsAg的检测是衡量HBV复制的重要指标。目前，商品化的HBsAg ELISA试剂盒可以满足临床中检测血清及其他体液中HBsAg和科研上检测细胞上清中HBsAg水平。涉及HBsAg的ELISA检测抗体多识别HBsAg的空间构象表位，极少识别HBsAg的线性表位。当前市面上缺少有效、简单并准确地用于Western blot检测HBsAg蛋白水平的HBsAg抗体。

发明内容

本发明提供了一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体及其应用，以解决现有技术的上述问题。

本发明的方案是：

一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体，单克隆抗体包括重链可变区与轻链可变区；

所述重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR1、如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR2与如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR3；

所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR1、氨基酸序列为KVS的轻链互补决定区LCDR2与如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR3。