[发明专利]一种降解3，5，6-三氯-2-吡啶酚的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种用于生物降解3，5，6‑三氯‑2吡啶酚（TCP）的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用，所述菌株为枯草芽孢杆菌ZW，保存编号为CGMCC25210。本发明枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.ZW，具有生长迅速、易分离培养、抗逆行强和对人、植物、动物没有致病性，不污染环境，生物安全性高等优点。同时，所述枯草芽孢杆菌ZW菌体细胞在21小时内能将初始浓度为50mg/L的TCP降解率达72%，具有较高的TCP降解效率，本发明对于微生物法降解毒死蜱或TCP尤其是生物修复毒死蜱污染的土壤及水体具有较高的应用价值。

技术领域

本发明属于微生物降解农药残留领域，涉及一种用于生物降解3，5，6-三氯-2吡啶酚（TCP）的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用。

背景技术

毒死蜱（Chlorpyrios）是一种中等毒性的有机磷农药，主要用于水稻、玉米、蔬菜、果树及茶树的病虫害防治。由于毒死蜱的大量生产和超量使用，在农业生产环境和农产品中，毒死蜱的高毒、难降解残留物TCP的污染问题日趋严重。

TCP具有环境毒性，其对土壤微生物的毒性是毒死蜱的2.5倍。研究发现，如果TCP含量过高（100 mg/L）会阻滞毒死蜱以及其它有机污染物的降解，进而影响生态环境系统的自我调节及修复功能。TCP对非靶标生物存在潜在危险，低浓度TCP便对水生生物和陆生生物产生中等毒性。TCP对人体也会产生危害，它不仅能够降低男性精子的质量和体内睾丸素合成的速率从而影响人体的生殖性能，还能引发青春期女性的睡眠呼吸障碍，最终影响其后代在婴儿期及以后的睡眠。目前，TCP已被美国环境保护局认定为持久性和移动性有毒农药代谢产物，并且在英国TCP也被列入危险指数最高的有毒代谢产物。

微生物降解是消除农药残留的有效手段，它具有安全、成本低、无二次污染等优点。目前国内外已有TCP降解菌株的报导。如，徐明刚等从山东某农药污水处理厂活性污泥中筛选出一株能够利用毒死蜱和TCP作为碳、磷和氮源用于自身生长的菌株副球菌属Paracoccus sp. strain TRP，李晓楼在对微生物降解甲基毒死蜱的研究中分离得到一株能够降解TCP的菌株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens ZHLXL-2，目前国内外分离的TCP降解菌株少，降解能力偏低等问题。本发明以长期施用毒死蜱农药的韭菜田土壤作为菌种来源，从中筛选高效降解TCP的菌株。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一类产生芽孢的革兰氏阳性菌株，具有生长迅速、易分离培养、抗逆行强和对人、植物、动物没有致病性，不污染环境，生物安全性高等优点。因此，本发明对于微生物法降解毒死蜱或TCP尤其是生物修复毒死蜱污染的土壤及水体具有较高的应用价值。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有的TCP高效降解菌株少，降解能力低等问题，提供一种用于高效降解TCP的枯草芽孢杆菌，该菌株的菌体细胞或芽孢对环境安全，且均能高效降解TCP，在修复毒死蜱或TCP污染的土壤及水体方面具有重要的应用前景。

本发明的第二个目的是提供一种降解TCP的枯草芽孢杆菌制剂及其应用，所述的枯草芽孢杆菌制剂由上述用于降解TCP的芽孢杆菌制成，能够高效生物降解TCP。

本发明第一方面提供了一种用于降解TCP的枯草芽孢杆菌，该菌株为革兰氏阳性，好氧，没有荚膜，有周生鞭毛，可以运动；生长较迅速、代谢旺盛、抗逆性强；在固体培养基上生长时，菌落的表面粗糙，呈污白或微黄色，有时会形成褶皱；在液体培养基中生长时，有时会形成絮状物。其所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌ZW，保藏编号为CGMCC 25210。在本发明的一些实施例中，所述枯草芽孢杆菌ZW菌体细胞在21小时内能将初始浓度为50mg/L的TCP降解率达72%。