[发明专利]一种提高羊卵巢储备的方法

说明书

本发明公开了一种提高羊卵巢储备的方法，涉及将ASMT基因的编码序列连接到羊源卵巢特异表达GDF9基因启动子，构建卵巢特异过表达载体pGDF9‑ASMT，通过原核胚显微注射、胚胎移植获得转基因阳性后代。与野生型相比，阳性母羊卵巢拥有更多的卵泡。对于羊ASMT的功能、卵巢局部褪黑素信号转导、生殖生物学和家畜生产学等的研究具有重要科学意义，可为ASMT在提高羊繁殖效率中的应用与作用机制研究提供新的参考。

技术领域

本发明涉及动物基因工程和遗传修饰技术领域，具体涉及羊卵巢ASMT特异过表达及其应用。

背景技术

羊产业是畜牧业的重要构成部分，发展草畜产业也是当前畜牧业节本减能增效的重要手段。尽管中国是养羊大国，然而，国内市场羊肉、奶产品消费量正逐年增加。相较于猪来说，绵羊的繁殖效率还比较低下，较低的繁殖效率增加了羊只的饲养成本，进而会影响其经济效益。

乙酰基-5-羟色胺-氧-甲基转移酶(N-acetylserotonin methyltransferase，ASMT)，是参与催化合成褪黑素的酶之一。据报道，ASMT的功能还包括：ASMT基因多态性与抑郁症高度相关。

然而，体内卵巢局部过表达ASMT对其繁殖表型的研究鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高羊卵巢储备的方法，即通过卵巢特异性过表达乙酰基-5-羟色胺-氧-甲基转移酶(N-acetylserotonin methyltransferase，ASMT)，获得拥有更多卵泡的ASMT转基因羊。

第一方面，本发明提供乙酰基-5-羟色胺-氧-甲基转移酶在提高卵巢储备中的用途。

在一些实施方案中，所述提高卵巢储备为提高卵泡数。

在一些实施方案中，所述提高卵巢储备为提高褪黑素局部表达。

在一些实施方案中，所述提高褪黑素局部表达为提高卵泡液中的褪黑素含量。

在一些实施方案中，所述提高卵巢储备为提高排卵数。

第二方面，本发明提供一种转基因动物的制备方法，所述方法包括将卵巢过表达乙酰基-5-羟色胺-氧-甲基转移酶基因的表达载体进行线性化处理，获得目的基因座片段，显微注射到动物原核胚的细胞质中，得到胚胎，将胚胎移植到受体的输卵管中，进行胚胎移植，得到所述转基因动物。

在一些实施方案中，所述表达载体的基因序列如SEQ ID NO.7所示。

在一些实施方案中，所述转基因动物包括羊、牛、马、猪、狗、猫和兔。

在一些实施方案中，所述羊包括绵羊(Ovis aries)和山羊(Capra hircus)。

在一些实施方案中，所述绵羊包括湖羊(Hu sheep)、萨福克羊(Suffolk sheep)、杜泊羊(Dorper sheep)和滩羊(Tan sheep)。

在一些实施方案中，用于鉴定转基因羊的特异性引物对序列如SEQ ID NO.8-9所示，引物正义链具有SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，引物反义链具有SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。

第三方面，本发明提供卵巢过表达ASMT基因的载体构建方法，包括以下步骤：

(1)获得带有重组末端的乙酰基-5-羟色胺-氧-甲基转移酶的编码序列；

(2)获得带有重组末端的卵巢特异性表达基因GDF9启动子序列；

(3)获得带有重组末端的Marker-Free-pCDNA3.1(-)骨架载体序列；

(4)将步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)获得的序列组装构建得到所述重组表达载体。