[发明专利]一种极度濒危植物荔波杜鹃的组培繁殖方法

权利要求书

1.一种荔波杜鹃的组培繁殖方法，包括外植体的选择、消毒、愈伤组织诱导、分化、壮苗及生根步骤，其具体特征在于包括以下步骤：取荔波杜鹃的开花后的当年新发嫩茎段为外植体，消毒先在自来水下冲洗30s，然后再用3ml洗洁精定容于1L水溶液中进行浸泡清洗3-5min，后用清水冲洗干净，用无菌水冲洗至无泡沫后转移至超净工作台，用75％的酒精消毒20s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1％升汞溶液(0.1g升汞固体溶解后定容至100ml水中)进行表面消毒8-12min，无菌水冲洗3-5遍后，进行如下培养：

1)培养基改良：改良的WPM培养基是将原培养基中NH₄NO₃ 400mg/L减少为330mg/L，原培养基中KNO₃由990mg/L减少为780mg/L，其余元素保持不变；

2)愈伤组织诱导：愈伤组织诱导培养基为改良WPM+1.5mg/L 2-iP(2-异戊烯腺嘌呤)+0.5mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)+1.0mg/L IAA(吲哚乙酸)，pH5.8，蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/L，pH5.8，暗培养7天后进行光照培养30-40天，光暗周期为10h/14h；

3)分化培养：将上述培养基中的愈伤组织转移至改良WPM+0.8mg/l 2-iP+0.1mg/L IAA+0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)，蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/L，pH5.8，分化培养30-40天，光暗周期为12h/12h；

4)壮苗及生根培养：将上述分化苗经切割后转接至壮苗及生根一体培养基，即改良WPM+2mg/L IAA，蔗糖35g/L，1800强度的琼脂7g/L，pH5.8，光暗周期为14h/10h；

培养条件均在光强度为2500LUX-3000LUX，温度为20-23℃；

移栽时，小苗在瓶内生长至3cm高，茎粗达到1.5mm-2mm，有浓密须根后自来水下冲洗小苗根部后进行移栽；移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土+1份进口泥炭土+1份红土；大棚温度为20-30度，湿度为40％-60％。