[发明专利]一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法

说明书

本发明提供了一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明提供了从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，可通用于不同物种的胎盘组织进行原代细胞培养，本发明的方法适合培养多物种的原代细胞，成功率高，在形态结构和生物学特性上更好的保持了体细胞的状态，本发明为原代细胞的研究提供了丰富的实验材料。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，尤其涉及一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法。

背景技术

动物遗传资源是生物和基因多样性的重要组成部分，这些动物遗传资源既是国家重要战略生物资源，同时也是生命科学研究基础材料与宝贵的家畜育种资源。动物遗传资源是人类社会赖以生存和发展的重要生物资源，是满足人类食物与健康需求的直接来源，同时也是国家重大战略性基础资源。

目前，我国动物种质资源的保存主要有：就地保护、易地保护和离体保存三种方式。遗传资源的保存实质就是对物种活体以及携带生命全部信息的精子、卵子、胚胎、细胞、组织、器官和基因组等的保护。由于动物体细胞中携带有全部遗传信息，只要有任何动物的体细胞就可以让其生长成一个完整的动物体。因此建立动物体细胞库，特别是建立重要、濒危畜禽遗传资源体细胞库是畜禽种质资源收集、整理、保存和利用最佳方法。如何在不伤害动物的情况下，取到动物组织实现细胞建系，建立细胞资源库，一直是动物资源收集保护工作者努力解决的问题。

细胞培养技术是生命科学研究领域重要研究技术，目前，细胞培养技术中最常用的原代细胞培养有组织块培养和分散细胞培养。其中，组织块培养法，成功率较高，但原代细胞生长周期长，容易污染且容易混杂由间质细胞分化来的成纤维细胞，不能在短时间内获得大量可供实验研究利用的细胞。并且，在细胞培养过程中应为细胞的生长提供一定的营养环境，而用于维持细胞生长的培养基需要根据不同来源的组织选择相应的培养液，在众多培养基中，何种培养基可以培养不同动物的胎盘组织以建立细胞资源库的方法并未见报道。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，可在不伤害动物的情况下，用于不同物种的胎盘组织进行原代细胞培养建系。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，包括如下步骤：

(1)将胎盘组织先用75％乙醇消毒，再用含2％双抗的DPBS冲洗，进行取样；

(2)将取样的组织块用DPBS漂洗，剪成细碎组织块，均匀铺在培养容器底部；

(3)倒置培养容器，于无组织面加入基础培养液，置于培养箱中培养；所述基础培养液为MEM-Alpha培养基+胎牛血清+1％双抗；

(4)培养5-6h后翻转培养瓶，使培养液浸润组织块，继续培养，当培养液颜色变黄时，更换培养液；

(5)待原代细胞从组织块爬出长满培养容器底部时，收集细胞。

优选的，所述步骤(3)中的基础培养液中胎牛血清的添加量按质量分数为10-15％。

优选的，所述步骤(3)中基础培养液的添加量为5-8mL。

优选的，所述双抗为10000U/mL青霉素+10000U/mL链霉素双抗。

优选的，所述步骤(2)中将组织置于基础培养液中剪切成细碎组织块。

优选的，所述步骤(1)中取样为在近胎儿端和近母体端各选2-3个位置取样，各位点取2-3cm³的组织块。

优选的，所述步骤(2)中将组织剪切成0.5-1mm³的细碎组织块。

优选的，所述步骤(3)中的培养箱温度为37℃，CO₂浓度为5％。