[发明专利]一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法在审
| 申请号： | 202210349510.4 | 申请日： | 2022-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN114591893A | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 李喜和;包斯琴;李云霞;郝晓丽;赵高平 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学;内蒙古赛科星家畜种业与繁育生物技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 崔玥 |
| 地址： | 010021 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 动物 胎盘 组织 获得 细胞 培养 方法 | ||
1.一种从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将胎盘组织先用75％乙醇消毒，再用含2％双抗的DPBS冲洗，进行取样；
(2)将取样的组织块用DPBS漂洗，剪成细碎组织块，均匀铺在培养容器底部；
(3)倒置培养容器，于无组织面加入基础培养液，置于培养箱中培养；所述基础培养液为MEM-Alpha培养基+胎牛血清+1％双抗；
(4)培养5-6h后翻转培养容器，使培养液浸润组织块，继续培养，当培养液颜色变黄时，更换培养液；
(5)待原代细胞从组织块爬出长满培养容器底部时，收集细胞。
2.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中的基础培养液中胎牛血清的添加量按质量分数为10-15％。
3.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中基础培养液的添加量为5-8mL。
4.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述双抗为10000U/mL青霉素+10000U/mL链霉素双抗。
5.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中将组织置于基础培养液中剪切成细碎组织块。
6.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中取样为在近胎儿端和近母体端各选2-3个位置取样，各位点取2-3cm3的组织块。
7.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中将组织剪切成0.5-1mm3的细碎组织块。
8.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中的培养箱温度为37℃，CO2浓度为5％。
9.根据权利要求1所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中的动物胎盘组织为使用生理盐水冲洗胚胎组织5-6次，于75％乙醇中浸泡10-15s，再放入含2％双抗的DPBS中浸泡，于4℃条件保存的动物胎盘组织。
10.根据权利要求1-9所述的从动物胎盘组织中获得原代细胞的培养方法在动物细胞资源收集中的应用。
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