[发明专利]定量测定新冠中和抗体的试剂及制备方法

说明书

一种定量测定新冠中和抗体的试剂及制备方法，包括：试剂一、试剂二与校准品；试剂一的核心成份为新冠假病毒，试剂一的缓冲剂为Tris,另外试剂一还含有蛋白酶抑制剂，BSA、甘油、蔗糖与咪唑作为蛋白蛋白保护剂及稳定剂，Proclin‑300作为试剂一的防腐剂；试剂二的核心成份为标记有ACE2的聚苯乙烯微球，试剂试剂二的缓冲剂为HEPES,另外含有BSA作为试剂二的蛋白保护剂、蔗糖作为试剂二的稳定剂；可定量测定样本中新冠中和抗体的浓度，量化评估疫苗免疫效果；操作简便；检测通量高使得一般每台仪器每小时可测试几百上千例样本；测定结果精密度良好；试剂成本较低。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种定量测定新冠中和抗体的试剂及制备方法。

背景技术

中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。

中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白。病毒侵入人体之后，免疫细胞把中和蛋白分泌到血液里，中和抗体与血液里的病毒颗粒结合，阻止病毒感染细胞，破坏病毒颗粒，这样就把病毒“中和”掉了。

目前的新冠中和抗体检测主要在生物安全三级实验室(BSL3)内进行。利用活病毒细胞培养的新冠中和试验检测，对实验室等级要求高，严重限制了临床大规模的推广使用。开发出可在生物安全二级实验室(BSL2)或普通实验室开展的快速新冠中和抗体检测方法，具有重要意义。当前也有一些研究团队开发了ELISA类测试，但此种方法操作复杂、耗时较长、对实验操作人源要求较高。也有一些团队开发了侧向层析类的测试，但此种方法不能准确定量、准确度较差，重复性较差。

发明内容

本发明的可定量测定样本中新冠中和抗体的浓度，量化评估疫苗免疫效果；操作简便；检测通量高使得一般每台仪器每小时可测试几百上千例样本；测定结果精密度良好；试剂成本较低。本发明的技术方案如下：

本发明的所述定量测定新冠中和抗体的试剂，包括：

试剂一、试剂二与校准品；

试剂一的核心成份为新冠假病毒，试剂一的缓冲剂为Tris, 另外试剂一还含有蛋白酶抑制剂，BSA、甘油、蔗糖与咪唑作为蛋白蛋白保护剂及稳定剂， Proclin-300作为试剂一的防腐剂；

试剂二的核心成份为标记有ACE2的聚苯乙烯微球，试剂试剂二的缓冲剂为HEPES, 另外含有BSA作为试剂二的蛋白保护剂、蔗糖作为试剂二的稳定剂， Proclin-300作为试剂二的防腐剂，试剂二的活化缓冲剂为PBS缓冲剂，试剂二还包括EDC溶液；

校准品用基质血清将新冠中和抗体稀释成如下梯度：0、25ng/ml、50ng/ml、200ng/ml、500 ng/ml与1000ng/ml而制得。

进一步的，所述试剂一中的新冠假病毒的含量为50PFU/L，试剂一的缓冲剂Tris的含量为20mMmol /L 且ph值为7.5，所述试剂一中的蛋白酶抑制剂包括胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白酶肽、EDTA与PMSF中的一种或者几种，所述蛋白酶抑制剂的含量为0.5 mg/L到35mg/L；所述蛋白蛋白保护剂及稳定剂中的BSA的含量为2g/L、甘油的含量5v/v、蔗糖的含量为5g/L与咪唑的含量为5g/L；作为试剂一的防腐剂的Proclin-300的含量为0.05%v/v。