[发明专利]蚊传黄病毒属特异性qPCR检测方法在审
| 申请号： | 202210307212.9 | 申请日： | 2022-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN114540552A | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 谢吕;周红宁;李曼;姜进勇;赵晓涛 | 申请（专利权）人： | 云南省寄生虫病防治所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 张换君 |
| 地址： | 665000 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蚊传黄 病毒 特异性 qpcr 检测 方法 | ||
1.一种检测蚊传黄病毒属病毒的引物组，其特征在于，所述引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物和SEQ ID NO：2所示的下游引物。
2.一种检测蚊传黄病毒属病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。
3.一种检测蚊传黄病毒属病毒的qPCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以待测样品cDNA为模板；
(2)利用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增，获取扩增产物；
(3)对扩增产物进行熔解曲线分析，判断待测样品类型。
4.根据权利要求3所述的检测蚊传黄病毒属病毒的qPCR方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增反应体系包括以下组分：2XPCR buffer 10μl，上下游引物浓度均为400nM，用量各0.8μl，cDNA模板1μl，ddH2O补足至20μl。
5.根据权利要求3所述的检测蚊传黄病毒属病毒的qPCR方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增反应程序为：95℃90s，1次循环；95℃5s，51℃15s，72℃30s，35次循环。
6.根据权利要求3所述的检测蚊传黄病毒属病毒的qPCR方法，其特征在于，步骤(3)中，所述熔解曲线分析程序为：65℃-95℃，每0.05秒升高0.5℃，连续采集荧光。
7.根据权利要求3所述的检测蚊传黄病毒属病毒的qPCR方法，其特征在于，若熔解曲线出现特异熔解峰，可判断待测样品为蚊传黄病毒属病毒。
8.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒在制备检测蚊传黄病毒属病毒感染产品中的应用。
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