[发明专利]一种敲除人SLC25A12基因的细胞株及其应用在审
| 申请号： | 202210211936.3 | 申请日： | 2022-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN114438087A | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 亓文宝;尹有勤;廖明;刘乐乐;邢金超;蒋誉婷;丁仕萍 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/66;C12N5/10;C12N7/00;C12N7/02;C12R1/91 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 苏运贞 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 slc25a12 基因 细胞株 及其 应用 | ||
1.一种靶向敲除人SLC25A12基因的gRNA序列，其特征在于：其核苷酸序列为：5′-AATATGTTTCTTAACTCATG-3′。
2.一种靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统，其特征在于：含有权利要求1中所述的靶向敲除人SLC25A12基因的gRNA序列。
3.权利要求2中所述的靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)根据所述的靶向敲除人SLC25A12基因的gRNA序列，设计合成gSLC25A12-F和gSLC25A12-R，将gSLC25A12-F和gSLC25A12-R进行退火磷酸化后形成含有粘性末端的片段gSLC25A12；
(2)使用BsmbI酶切CRISPR/Cas9慢病毒载体LentiCRISPRv2，得到酶切后的LentiCRISPRv2载体；
(3)将步骤(1)的gSLC25A12与酶切后的LentiCRISPRv2载体连接，得到所述的靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统，命名为LentiCRISPRv2-SLC25A12；
所述的gSLC25A12-F的序列为：5′-caccgAATATGTTTCTTAACTCATG-3′；
所述的gSLC25A12-R的序列为：5′-aaacCATGAGTTAAGAAACATATTc-3′。
4.权利要求2中所述的靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统在制备敲除人SLC25A12基因的细胞株中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述的细胞株为人Hela细胞株。
6.一种敲除人SLC25A12基因的细胞株的制备方法，其特征在于：将权利要求2中所述的靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统转染目的细胞株。
7.根据权利要求6所述的敲除人SLC25A12基因的细胞株的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将所述的靶向敲除人SLC25A12基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统通过包装细胞进行包装，得到慢病毒颗粒；
(2)将慢病毒颗粒感染目的细胞株，得到敲除人SLC25A12基因的细胞株。
8.一种敲除人SLC25A12基因的细胞株，其特征在于：通过将权利要求6或7中所述的制备方法制备得到。
9.权利要求8中所述的敲除人SLC25A12基因的细胞株在病毒增殖中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：
所述的病毒为乙型脑炎病毒。
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