[发明专利]一种提高单克隆抗体腹水产量的方法

说明书

本发明公开了一种提高单克隆抗体腹水产量的方法，包括以下步骤：(1)杂交瘤细胞制备：用所需抗原免疫6‑8周龄雌性BALB/c小白鼠，再取免疫鼠的脾脏制备细胞悬浮液，与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选获得分泌抗体的阳性单克隆细胞，即获得杂交瘤细胞；(2)抗体腹水制备：取10周龄雄性BALB/c小白鼠腹腔注射降脂烷，7天后腹腔注射不完全佐剂，3天后再注射所述杂交瘤细胞；(3)腹水收集：接种杂交瘤细胞5天以后观察并采集小鼠腹水；(4)抗体纯化：将采集的腹水离心去沉淀后过滤除去油脂，用PBS缓冲液稀释腹水，然后进行二次过滤，再过proteinA柱纯化，得到纯化的抗体。本发明通过改变致敏方法显著提高了腹水产量。

技术领域

本发明涉及单克隆技术领域，特别是涉及一种提高单克隆抗体腹水产量的方法。

背景技术

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，因其具备高特异性的特点而广泛用于生物领域的基础研究、疾病诊断和疾病的治疗。近年来由于单克隆抗体用量的增加以及单克隆抗体制备成本高产量低等原因，产量已无法满足市场需求。

目前制备单克隆抗体的方法有体内和体外两种，体外技术是随着细胞发酵技术的发展，实现了单克隆抗体杂交瘤细胞的规模化培养，但该方法对生产设备和生产环境的要求高，设备价格昂贵，导致生产线运行的成本高，无法普及。体内技术是采用近交系的BALB/c小白鼠生产抗体，该小鼠与骨髓瘤细胞以及融合用脾脏细胞小鼠同品系，因而生产腹水首选BALB/C，且该小鼠个体差异小，腹水中抗体含量高，可高达10mg/ml，但是用降植烷或者液体石蜡等诱导该小鼠产生腹水产量一直不理想。

因此亟需提供一种新型的提高单克隆抗体腹水产量的方法来解决上述问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种提高单克隆抗体腹水产量的方法，能够显著提高单克隆抗体腹水的产量。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种提高单克隆抗体腹水产量的方法，包括以下步骤：

(1)杂交瘤细胞制备：用所需抗原免疫6-8周龄雌性BALB/c小白鼠，再取免疫鼠的脾脏制备细胞悬浮液，与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选获得分泌抗体的阳性单克隆细胞，即获得杂交瘤细胞；

(2)抗体腹水制备：取10周龄雄性BALB/c小白鼠腹腔注射降脂烷，7天后腹腔注射不完全佐剂，3天后再注射步骤(1)制得的所述处于对数生长期的杂交瘤细胞；

(3)腹水收集：接种杂交瘤细胞5天以后观察并采集小鼠腹水；

(4)抗体纯化：将采集的腹水离心去沉淀后过滤除去油脂，用PBS缓冲液稀释腹水，然后进行二次过滤，再过proteinA柱纯化，得到纯化的抗体。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(1)中，所述小鼠骨髓瘤细胞为骨髓瘤细胞SP2/0。

在本发明一个较佳实施例中，所述小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞的融合比例为2∶1-5∶1。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(2)中，BALB/c小白鼠腹腔注射降脂烷的量为0.3-0.5ml/只，注射不完全佐剂的量为0.3-0.5ml/只。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(2)中，注射杂交瘤细胞的量为每只小鼠注射接种0.5×10⁶-1.0×10⁶个细胞。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，采集小鼠腹水的次数至多为3次，采集腹水量为15-20ml。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，将采集的腹水在4℃下 10000rpm-15000rpm离心15-30min。

在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，二次过滤采用0.22um针头过滤器进行过滤。