[发明专利]一种提高单克隆抗体腹水产量的方法在审
| 申请号： | 202210144181.X | 申请日： | 2022-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN114716545A | 公开（公告）日： | 2022-07-08 |
| 发明（设计）人： | 郭本跃;陈丽萍;胡容;陈一凡 | 申请（专利权）人： | 安徽惠邦生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K1/22;C07K1/34;C07K1/36 |
| 代理公司： | 合肥市上嘉专利代理事务所(普通合伙) 34125 | 代理人： | 李璐 |
| 地址： | 230088 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 单克隆抗体 腹水 产量 方法 | ||
1.一种提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)杂交瘤细胞制备：用所需抗原免疫6-8周龄雌性BALB/c小白鼠，再取免疫鼠的脾脏制备细胞悬浮液，与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选获得分泌抗体的阳性单克隆细胞，即获得杂交瘤细胞；
(2)抗体腹水制备：取10周龄雄性BALB/c小白鼠腹腔注射降脂烷，7天后腹腔注射不完全佐剂，3天后再注射步骤(1)制得的所述处于对数生长期的杂交瘤细胞；
(3)腹水收集：接种杂交瘤细胞5天以后观察并采集小鼠腹水；
(4)抗体纯化：将采集的腹水离心去沉淀后过滤除去油脂，用PBS缓冲液稀释腹水，然后进行二次过滤，再过proteinA柱纯化，得到纯化的抗体。
2.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述小鼠骨髓瘤细胞为骨髓瘤细胞SP2/0。
3.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞的融合比例为2：1—5:1。
4.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(2)中，BALB/c小白鼠腹腔注射降脂烷的量为0.3—0.5ml/只，注射不完全佐剂的量为0.3—0.5ml/只。
5.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(2)中，注射杂交瘤细胞的量为每只小鼠注射接种0.5×106—1.0×106个细胞。
6.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(3)中，采集小鼠腹水的次数至多为3次，采集腹水量为15—20ml。
7.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(3)中，将采集的腹水在4℃下10000rpm-15000rpm离心15—30min。
8.根据权利要求1所述的提高单克隆抗体腹水产量的方法，其特征在于，在步骤(3)中，二次过滤采用0.22um针头过滤器进行过滤。
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