[发明专利]基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法

说明书

本发明涉及过氧化氢酶活度检测领域，具体涉及一种基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，该方法基于H₂O₂/Fe²⁺作用下的臧红T荧光猝灭体系实现过氧化氢酶活度测定，荧光试剂臧红T于575 nm处有最大发射波长，Fe²⁺催化H₂O₂氧化臧红T导致其荧光猝灭，过氧化氢酶分解H₂O₂引起荧光回位，通过过氧化氢酶加入前后荧光猝灭值△F获取过氧化氢酶的活度，其中，△F=0.7527+1807E(U/mL)，r=0.9980，最低检测限达到3.81×10^‑5 U/mL。本发明方法操作简便、快速、灵敏度高，可成功用于健康人体血清过氧化氢酶活度分析，有较好的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及过氧化氢酶活度检测领域，具体涉及一种基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法。

背景技术

过氧化氢酶(catalase，CAT)广泛存在于人体内，被作为与抗肿瘤，抗衰老有密切关系的酶学指标拉入临床常规检测。在过氧化氢酶活度测定文献报道中有紫外-可见光度法、滴定法等。近年来，显色光度法和褪色光度法备受关注，然而显色剂溶液的保存是一大障碍，随用随配难于满足临床检验要求；褪色光度法的准确度相对不高。荧光检测因其背景信号小、灵敏度及准确度高等优异性能已应用在活度分析。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，操作简便、快速、灵敏度高，可成功用于健康人体血清过氧化氢酶活度分析，有较好的临床应用前景。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，该方法基于H₂O₂/Fe²⁺作用下的臧红T荧光猝灭体系实现过氧化氢酶活度测定，荧光试剂臧红T于575 nm处有最大发射波长，Fe²⁺催化H₂O₂氧化臧红T导致其荧光猝灭，过氧化氢酶分解H₂O₂引起荧光回位，通过过氧化氢酶加入前后荧光猝灭值△F获取过氧化氢酶的活度，其中，△F=0.7527+1807E(U/mL)，r=0.9980，最低检测限达到3.81×10^-5 U/mL。

本发明所述的基于臧红T荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法包括如下步骤：

取人体血清25~100 μL置于容量瓶中，加入1.00 mL H₂O₂底液，恒温30 ^oC下反应10min后，立即加入0.80 mL Fe²⁺、3.00 mL 臧红T，室温反应15 min后定容，臧红T空白作参比，在1 cm吸收池中测定575 nm发射波长处荧光强度F；

测定酶空白体系F₀，测定时，在H₂O₂之前加入Fe²⁺完成酶失活，后续方法同前；

过氧化氢酶活度E由△F确定，其中，△F = F- F₀，△F=0.7527+1807E(U/mL)，r=0.9980。