[发明专利]源自多能干细胞的血管平滑肌细胞的生成方法、用途及其相关组合物

说明书

本公开涉及从前体干细胞制备血管平滑肌样细胞的方法。在一些实施方案中，所述血管平滑肌样细胞能够对血管活性药物做出反应而收缩。在一些实施方案中，所述方法包括将多能干细胞与中胚层诱导生长培养基接触，然后在存在胶原的情况下，在无血清血管平滑肌细胞生长培养基中复制细胞，纯化表达钙黏蛋白‑2的复制细胞。在一些实施方案中，所述纯化细胞用于治疗或预防心血管疾病或症状。

交叉引用

本申请要求序列号为63/007698、2020年4月9日递交的美国临时申请的权益。所述申请通过引用全部并入本文，用于所有目的。

关于联邦资助研究和开发的声明

本公开是在美国国立卫生研究院授权的DK108245、HL127759的政府支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。

通过引用并入的材料通过电子申请系统(EFS-WEB)以文本文件形式提交

与本申请相关的序列表以文本格式提供，而不是纸质副本，并通过引用并入说明书。包含序列表的文本文件的名称是19072PCT_ST25.txt。文本文件为10KB，创建于2021年4月8日，通过EFS-Web以电子方式提交。

背景技术

功能障碍型血管通常是在心肌梗死(MI)和外周动脉疾病(PAD)等心血管缺血状况下产生的。这些疾病通常涉及血管的动脉粥样硬化闭塞，导致血液循环不良，最终导致组织坏死。因此，有必要确定应对血管功能障碍后果的改善方法。

除内皮细胞外，血管平滑肌细胞(VSMC)也存在于血管中。VSMC存在于收缩(分化)表型中，其具有平滑肌细胞分化特异性抗原(SMTN)和平滑肌肌球蛋白重链表达的特征。血管平滑肌细胞(VSMC)的收缩力丧失和上皮表型的获得与增殖性血管病变有关，如血管炎症、斑块形成、动脉粥样硬化、再狭窄和肺动脉高压。然而，当分离并在血清中培养时，VSMC转化为一种低分化的状态，称为增殖性合成表型。因此，有必要确定改善方法以产生和维持VSMC，从而维持收缩表型。

Cheung等人报道了生成人类血管平滑肌亚型(Nat Biotechnol.2012,30(2):165–173)。Patsch等人报道了从人类多能干细胞产生血管内皮细胞和平滑肌细胞(Nat CellBiol 2015,17:994–1003)。

本文引用的参考文献不是对现有技术的承认。

发明内容

本公开涉及从前体干细胞制备血管平滑肌样细胞的方法。在一些实施方案中，所述血管平滑肌样细胞能够对血管活性药物做出反应而收缩。在一些实施方案中，所述方法包括将多能干细胞与中胚层诱导生长培养基接触，然后将在存在胶原的情况下，在无血清血管平滑肌细胞生长培养基中复制细胞，纯化表达钙黏蛋白-2的复制细胞。在一些实施方案中，所述纯化细胞用于治疗或预防心血管疾病或症状。

在一些实施方案中，本公开涉及在收缩表型中产生血管平滑肌样细胞的方法，包括将多能干细胞转化为表达平滑肌细胞分化特异性抗原和平滑肌肌球蛋白重链的细胞，并纯化表达钙黏蛋白-2的细胞，提供在收缩表型中表达血管平滑肌样细胞的钙黏蛋白-2的纯化组分。在一些实施方案中，所述方法进一步包括复制表达钙黏蛋白-2的血管平滑肌样细胞。