[发明专利]测定羧酸酯酶1的特异性生物发光探针底物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物，其特征在于，结构通式如下：

其中，R₁选自H、C₁-C₁₀烷基、-(C1-C8亚烷基)-羧基、-(C1-C8亚烷基)-酯基、-(C1-C8亚烷基)-氨基、-(C1-C8亚烷基)-氰基、-(C1-C8亚烷基)-硝基、-(C1-C3亚烷基)-O-(C1-C3烷基)、碳环基、-(C1-C3亚烷基)-碳环基、芳基、-(C1-C3亚烷基)-芳基、杂芳基、-(C1-C3亚烷基)-杂芳基、杂环基或-(C1-C3亚烷基)-杂环基；R₂选自C₁-C₁₀烷基。

2.一种如权利要求1所述测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物的制备方法，其特征在于，步骤包括：

1)化合物2发生氰基取代反应，获得化合物3；

2)化合物3发生氰基水解生成相应的酸；

3)经过酯化反应生成测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物。

3.权利要求1所述测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物在鉴定羧酸酯酶1或者测定羧酸酯酶1活性方面的应用。

4.一种测定羧酸酯酶1活性的方法，其特征在于，将权利要求1所述特异性荧光探针底物与待测样品反应，测定异性荧光探针底物或其水解后的羧基产物，定性或定量测定羧酸酯酶1。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤包括：

磷酸盐缓冲体系中加入测定羧酸酯酶1特异性荧光探针底物，反应温度为20～60℃，孵育体系pH为5.5～10.5，加入荧光素酶启动生物发光反应，反应时间为10～20min；检测荧光强度，根据特异性荧光探针底物减少量或羧基产物生成量作为羧酸酯酶1活性的评价指标；

或者，磷酸盐缓冲体系中加入测定羧酸酯酶1特异性荧光探针底物，反应温度为20～60℃，孵育体系pH为5.5～10.5，反应10～20min；用液相在紫外256-365nm检测特异性荧光探针底物或羧基产物，根据特异性荧光探针底物减少量或羧基产物生成量作为羧酸酯酶1活性的评价指标。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，反应温度为34～42℃，孵育体系pH为5.5-7.0。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用HPLC或者LCMS在紫外256-365nm检测特异性荧光探针底物或羧基产物。

8.权利要求1所述的测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物在筛选或评估羧酸酯酶1的抑制剂或诱导剂方面的应用。

9.权利要求1所述的测定羧酸酯酶1的特异性荧光探针底物在荧光生物成像方面的应用。