[发明专利]N-乙酰-D-乳糖胺在诱导hUC-MSC向神经元细胞分化中的应用

说明书

本发明公开了N‑乙酰‑D‑乳糖胺在诱导hUC‑MSC向神经元细胞分化中的应用。本发明发现N‑乙酰‑D‑乳糖胺可以促进hUC‑MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化，因而可以将其用于hUC‑MSC体外诱导培养制备治疗神经疾病的细胞。

技术领域

本发明属于干细胞治疗领域，具体涉及N-乙酰-D-乳糖胺在诱导hUC-MSC向神经元细胞分化中的应用。

背景技术

中枢神经系统退化或损害会导致不可逆的神经元丧失，并经常出现持续的功能缺陷，给患者、家庭和社会带来巨大的健康和经济负担。虽然目前临床上已采用多种治疗措施并取得了一定进展，但治疗效果仍不尽如意。过去20年，神经保护疗法受到了极大的关注，干细胞的出现为中枢神经系统疾病的治疗开辟了新的途径。

人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)是一种存于脐带华通胶中的干细胞，来源于发育早期的中胚层，形态和生物学特性与骨髓间充质干细胞相似，可以跨胚层诱导分化为骨、软骨、真皮组织、骨骼肌、心肌细胞及神经元等多种类型细胞，在组织再生和创伤修复等方面具有重要作用。目前国内外多家干细胞治疗中心已开展了hUC-MSC治疗帕金森病、脊髓损伤、脑瘫、多发性硬化、老年痴呆、脊髓小脑共济失调等神经系统疾病的临床研究。

诱导hUC-MSC向神经元细胞分化是hUC-MSC应用于神经系统疾病研究的重要内容。

发明内容

本发明目的在于提供N-乙酰-D-乳糖胺在诱导hUC-MSC向神经元细胞分化中的应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

N-乙酰-D-乳糖胺在体外促进MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化中的应用。

根据上述N-乙酰-D-乳糖胺在体外促进MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化中的应用，所述MSC为hUC-MSC。

N-乙酰-D-乳糖胺在制备促进MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化的培养基中的应用。

根据上述N-乙酰-D-乳糖胺在制备促进MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化的培养基中的应用，所述MSC为hUC-MSC。

有益效果：

本发明发现N-乙酰-D-乳糖胺在体外可以促进hUC-MSC增殖并诱导其向神经元细胞分化，因而可以将其用于hUC-MSC体外诱导培养制备治疗神经疾病的细胞。

附图说明

图1为倒置显微镜观察的脐带间充质干细胞。

图2为免疫荧光染色结果。

具体实施方式

一、材料

人脐带间充质干细胞购自赛业(广州)生物科技有限公司。DMEM/F12培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司。CCK-8检测试剂、双抗购自上海碧云天生物。N-乙酰-D-乳糖胺购自上海易恩化学技术有限公司，纯度98％。

二、方法

1、脐带间充质干细胞的复苏和培养

取出人脐带间充质干细胞冻存管，立即放入37℃恒温水浴中，解冻溶解后用DMEM/F12培养液洗涤，充分吹打，常温条件1000rpm离心10min，弃上清液，用含有10％胎牛血清和双抗的DMEM/F12培养液重悬细胞并接种，置于37℃、体积分数为5％CO₂、饱和湿度条件下培养，24h后全量换液，之后每3d重复操作1次。当贴壁细胞融合达约85％时，按照1:2的比例传代，倒置显微镜观察细胞的生长情况。

2、CCK-8法测定细胞增殖活性