[发明专利]一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用

说明书

本发明公开了一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用。本发明发现斑马鱼cd99l2基因具有与斑马鱼原始红系造血相一致的时空表达谱，仅在斑马鱼原始造血阶段的红细胞中高表达。本发明通过构建Tg(cd99l2‑4.7k promoter eGFP)转基因斑马鱼进一步发现，利用cd99l2作为标记时标记的细胞类型为未成熟的红系前体细胞，且不影响红细胞生成。因此，可将该转基因斑马鱼用于制备特异标记原始红系造血过程的动物模型，用于研究原始造血过程以及原始红细胞发育过程，还可用于制备用于筛选治疗红细胞增多或者减少性疾病药物的模型。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用。

背景技术

斑马鱼造血发育由两次截然不同但在时间轴上重叠的两个过程组成：原始造血阶段和定向造血阶段。原始造血阶段在胚胎早期快速生长发育时，通过产生血红细胞协助组织快速氧化产生能量；原始造血阶段持续时间短暂，在胚胎发育过程中，只通过分化产生原始红细胞以及少量巨噬细胞。发育后期的定向造血阶段则可以产生具有分化潜能的造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)，造血干细胞通过分化产生个体组织需要的所有造血谱系细胞。在以往的研究中，由于原始造血阶段和定向造血阶段是时空交错，且目前发现的所有标记红细胞的基因在原始造血阶段和定向造血阶段中都有表达，难以区分，这让研究原始造血阶段变得困难。因此，亟需提供一种能有效标记原始红细胞的斑马鱼模型。

人源以及鼠源的CD99L2蛋白由位于X号染色体的MIC2L基因编码，是位于细胞膜上的O-连接糖基化细胞跨膜蛋白。CD99L2蛋白结构简单，为I型跨膜蛋白，分为一个跨膜结构域，一个小的含有脯氨酸富集序列(EPPP-PEPPR)胞内域和一个100个氨基酸左右的胞外域。CD99L2蛋白分布广泛，主要表达在血管内皮细胞之间的连接处、中心粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞膜的表面，但在不同细胞表达水平有差异。小鼠体内、外研究证实：CD99L2可招募中性粒细胞和淋巴细胞到炎症区域的血管，介导中性粒细胞穿过血管内皮细胞间隙以及间底膜，即炎症时白细胞渗出过程，但不介导淋巴细胞渗出。Vestweber D等研究证实：cd99l2基因的失活导致中性粒细胞在血管内皮细胞和基底膜之间腔隙聚集，在白细胞渗出过程的第三阶段受阻。此外，Zhao T等成功地从小鼠B淋巴细胞瘤细胞株中克隆了鼠源性cd99l2，体外和体内实验均证实鼠源型CD99L2与 B细胞淋巴瘤发生相关，表明cd99l2基因在髓系细胞的迁移以及白细胞在炎症免疫中发挥功能起到不可替代的重要作用。例如，专利《通过干扰CD99L2阻断白细胞迁出和炎症》中就通过干扰CD99L2阻断白细胞迁出和炎症。但关于cd99l2 基因在原始红细胞中的表达还未见报道，其在原始红细胞发生中的作用也不明确。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何提供一种转基因斑马鱼，使其可用于制备特异标记原始红系造血过程的动物模型，用于原始红细胞发育研究、红细胞增多或减少症研究及其大规模备选药物筛选。

本发明的第一个目的是提供cd99l2基因在制备特异标记原始红系造血过程的转基因斑马鱼中的应用。

本发明的第二个目的是提供一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用。

本发明的第三个目的是提供所述Tg转基因斑马鱼在制备用于筛选治疗红细胞增多或者减少性疾病药物的模型中的应用。

本发明的第四个目的是提供所述Tg转基因斑马鱼在制备用于研究原始红细胞发育过程的模型中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：