[发明专利]一种混合型离子交换填料的单抗纯化方法

权利要求书

1.一种混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、鼠源腹水的深层过滤，得到浊度低于40NTU的样品溶液；

S2、装填200ml蓝胶填料至中空层析柱中，安装完后将层析柱连接AKTA设备，用0.1MNaOH冲洗蓝胶柱5个柱体积，用纯化水洗涤5个柱体积，用平衡缓冲液20 mM Tris平衡蓝胶柱4个柱体积进行柱准备；

S3、取90ml中步骤S1中得到的样品，加入等体积的20mM Tris缓冲液稀释上步骤S2的蓝胶柱，收集样品；

S4、装填50ml Q柱填料至中空层析柱中，安装完后将层析柱连接AKTA设备，用0.1MNaOH冲洗Q柱5个柱体积，用纯化水洗涤5个柱体积，用平衡缓冲液20mM Tris平衡Q柱4个柱体积进行柱准备；

S5、取步骤S3收集的样品，上步骤S4的Q柱，上样结束后使用洗杂缓冲液洗杂，再用解离缓冲液进行解离；

S6、步骤S5解离完成的样品用0.22μm滤膜过滤后，添加0.1% Proclin 300，-20℃长期保存。

2.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中，鼠源腹水的深层过滤的步骤为：将冷冻的腹水在水浴融化，用脱脂棉过滤，再使用孔径为0.04-9μm的深层过滤器过滤并收集滤液，得到浊度低于40NTU的样品溶液。

3.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S3中，样品收集的方法为上样过程中在线监测UV值，当UV值升至200mAu时，开始收集，降至200mAu以下，收集结束。

4.根据权利要求1或3所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S3收集结束后，使用20mM Tris+1.4M NaCl清洗蓝胶柱，至UV值显示为0，再用纯化水洗涤5个柱体积；蓝胶柱长期不使用则柱内填充20%乙醇，4-8℃保存。

5.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S5中，洗杂方法为用10mM PB+30mM NaCl缓冲液冲洗Q柱10个柱体积，至UV值降到0。

6.根据权利要求5所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S5解离结束后，使用20mM Tris+1.4M NaCl清洗Q柱，至UV值显示为0，再用纯化水洗涤5个柱体积；Q柱长期不使用则柱内填充20%乙醇，4-8℃保存。

7.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S5解离结束后，使用20mM Tris+1.4M NaCl清洗Q柱，至UV值显示为0，再用纯化水洗涤5个柱体积；Q柱长期不使用则柱内填充20%乙醇，4-8℃保存。

8.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述步骤S5中，解离收集方法为用10mM PBS解离，在线监测UV值，当UV值升至200mAu时，开始收集，降至200mAu以下，收集结束。

9.根据权利要求1所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述Tris的pH均为8.0。

10.根据权利要求6所述的混合型离子交换填料的单抗纯化方法，其特征在于，所述PB和PBS的pH=7.4。