[发明专利]一种酶法合成手性枸橼酸托法替布中间体的方法

权利要求书

1.一种酶法合成手性枸橼酸托法替布中间体的方法，其特征在于：

1)在转氨酶催化剂的存在下，反应底物TOF15与氨基供体反应生成手性的TOF20-A，

2)TOF20-A再与甲基化试剂进行甲基化反应，加入缚酸剂得到TOF25-A，也即游离的(3R,4R)-1-苄基-N,4-二甲基哌啶-3-胺，或者TOF25-A进一步成盐酸盐得到(3R,4R)-1-苄基-N,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐(TOF30)；

其中，所述转氨酶催化剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

其反应方程式为：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氨基供体为异丙胺、叔丁胺、丙氨酸或丁氨酸中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，反应在溶剂中进行，溶剂为水、有机溶剂或水与合溶剂的混合溶剂，所述有机溶剂是二甲亚砜、四氢呋喃或DMF中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中反应体系的pH值为7-10，反应温度为10-50摄氏度。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，溶剂为水与二甲亚砜的混合溶剂，反应体系的pH值为7-8，反应温度为15-25摄氏度。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，甲基化反应所用的甲基化试剂选自碘甲烷或硫酸二甲酯，所述缚酸剂为碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠的一种或多种；步骤2)反应在溶剂中进行，溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述甲基化试剂为碘甲烷，所述缚酸剂为碳酸钾，所用反应溶剂为二氯甲烷。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，甲基化反应温度为15-25℃。