[发明专利]一种DNA洗脱液及其应用

说明书

本发明属于昆虫鉴定领域，具体涉及一种DNA洗脱液。本发明DNA洗脱液，包括Tris‑HCl、NaCl、EDTA、Triton X‑100、SDS、尿素、硫脲和蛋白酶K。所述Tris‑HCl为缓冲体系，调节洗脱液的pH；NaCl为等渗体系，维持洗脱液的渗透压；EDTA能够促进细胞分离；Triton x‑100破坏细胞释放基因组DNA；SDS为强变性剂，能够溶解蛋白；尿素和硫脲提高膜蛋白的融解；蛋白酶K能够水解蛋白质。本发明通过将上述原料组合制备DNA洗脱液能够洗脱出少量存在于昆虫体表的组织细胞基因组DNA用于分子鉴定，并且不会对昆虫体表产生损伤，保持昆虫形态的完整性，用于形态学的系统鉴定。

技术领域

本发明属于昆虫鉴定领域，具体涉及一种DNA洗脱液及其应用。

背景技术

蠓虫(Midges)俗称“小咬”，“墨蚊”，属双翅目微小型昆虫，已知蠓虫有131属，6334种，分布广泛。蠓虫是蓝舌病、鹿流行性出血热、马脑炎、非洲马瘟、中山病、阿卡斑、施马伦贝格病毒病、奥西罗热、牛流行热、水泡口炎等多种人或动物疾病的传播媒介。不同的蠓虫种类对这些病原的媒介传播效能不同，因此不同种类蠓虫的分布及生态结构决定了这些疾病的发生、流行以及对人或动物健康危害的严重程度，对蠓虫的鉴定和识别，是监测与控制蠓传疾病发生的基础，也是疾病预防与控制领域的核心步骤。然而由于蠓虫中存在许多具有多处相似特征的隐种(cryptic species)组成的复合体(complex)或种团(group)，仅用传统的形态学鉴别方法难以对蠓虫进行准确的分类。近年来随着分子生物学技术的发展，依据蠓虫基因核苷酸序列为基础进行的蠓虫分子遗传学分类方法越来越广泛应用于蠓传的分类鉴定中，因此在形态学分类鉴定的基础上，还需要结合依据蠓虫基因核苷酸序列为基础进行的蠓虫分子遗传学分类的分子生物学分类鉴定方法对蠓虫进行系统准确的分类鉴定。但目前分子生物学分类方法大多是对蠓传虫体整体或部分进行研磨，然后提取昆虫基因组DNA，这种方法破坏了昆虫形态，不能进行压片等形态学系统的分类鉴定，并且给其它一些相关的研究工作带来困难。因此，如何获取蠓虫DNA用于分子鉴定的同时还能保持蠓虫形态的完整性，使其仍可以通过形态学进行系统鉴定是昆虫鉴定行业亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA洗脱液及其应用，本发明提供的DNA洗脱液不仅能够洗脱昆虫体表少量的组织细胞基因组DNA用于分子鉴定，而且能够保持昆虫形态的完整性，用于形态学的系统鉴定。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种DNA洗脱液，包括Tris-HCl、NaCl、EDTA、Triton X-100、SDS、尿素、硫脲和蛋白酶K。

优选的，所述Tris-HCl的pH为7.6～8.6；

所述DNA洗脱液中Tris-HCl的浓度为50mM～1M。

优选的，所述DNA洗脱液中NaCl的浓度为150mM～5M。

优选的，所述DNA洗脱液中EDTA的浓度为1mM～0.5M。

优选的，所述DNA洗脱液中Triton x-100的浓度为0.3％～2％。

优选的，所述DNA洗脱液中SDS的浓度为0.1％～10％。

优选的，所述DNA洗脱液中尿素的浓度为5～7M。

优选的，所述DNA洗脱液中硫脲的浓度为2M。

优选的，所述蛋白酶K的pH为4～12.5；

所述DNA洗脱液中蛋白酶K的浓度为50～100μg/mL。

本发明还提供了上述DNA洗脱液在昆虫鉴定中的应用，所述昆虫包括蠓虫、蚊虫、蚋、白蛉或蚂蚁。