[发明专利]一种CAR-T细胞培养用的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种CAR‑T细胞培养用的培养基及其应用。本发明CAR‑T细胞培养用的培养基包括基本培养基和达托霉素。本发明在研究中发现，达托霉素能提高CAR‑T细胞的抗耗竭能力和肿瘤杀伤能力，D‑CAR‑T耗竭水平显著低于普通CAR‑T，在持续杀伤的情况下，D‑CAR‑T仍然保持高效的杀伤能力，增强了CAR‑T细胞的抗肿瘤功能。

技术领域

本发明涉及细胞工程领域，特别是涉及一种CAR-T细胞培养用的培养基及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell，CAR-T)是通过基因工程技术使T淋巴细胞表达特异性抗体的结合位点，并能通过非主要组织相容性复合体(MHC)限制性的方式特异性识别并杀伤肿瘤细胞的细胞。CAR-T技术的开发与应用在恶性血液病癌症免疫治疗中展现了卓越的应用效果。尤其是近年来开发的CD19靶向的CAR-T技术在急性B淋巴细胞白血病(B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)中得到了显著的治疗效果，其中两款(CD28z、4-1BB)被FDA批准为复发性/难治性的B淋巴细胞白血病的有效治疗手段。

尽管在临床中CAR-T细胞疗法对B-ALL完全缓解率已经达到了90％，CAR-T技术仍然面临着复发率高、易于耗竭、特异性靶向开发难等重大挑战。目前，国内外研究者对CAR-T细胞功能的衡量主要集中在细胞亚群、耗竭标志性分子表达、杀伤效果三个层面上。Milone等人在2018年指出减少CAR-T细胞体外培养的时间可以增大其中央记忆型T细胞(CentralMemory T cell,T_CM)的比重，从而在小鼠体内发挥更好的疗效，延长肿瘤复发的时间(DufvaO,Koski J,Maliniemi P,et al.Integrated drug profiling and CRISPR screeningidentify essential pathways for CAR T-cell cytotoxicity[J].Blood,The Journalof the American Society of Hematology,2020,135(9):597-609.)，说明T细胞亚群的比例变化是影响CAR-T治疗的重要因素。此外，多篇文章已经证实利用GSK3β小分子抑制剂可以显著性下降PD1的蛋白水平，从而延长CAR-T细胞的存活时间([1]Sengupta S,Katz S C,Sengupta S,et al.Glycogen synthase kinase 3inhibition lowers PD-1expression,promotes long-term survival and memory generation in antigen-specific CAR-Tcells[J].Cancer letters,2018,433:131-139.[2]Martinez M,Moon E K.CAR T cellsfor solid tumors:new strategies for finding,infiltrating,and surviving in thetumor microenvironment[J].Frontiers in immunology,2019,10:128.)。而在CAR-T杀伤方面，Lenalidomide(来那度胺)则被证实能够促进CAR-T细胞对多发性骨髓瘤的杀伤作用(Wang X,Walter M,Urak R,et al.Lenalidomide enhances the function ofCS1chimeric antigen receptor–redirected T cells against multiple myeloma[J].Clinical Cancer Research,2018,24(1):106-119.)。总之，从三个方面上对CAR-T细胞功能进行改善有助于提升CAR-T治疗的效果。

达托霉素(分子式C72H101N17O26，CAS号103060-53-3)是一种新型环脂肽类抗生素，对临床上常见的革兰氏阳性菌具有快速杀菌活性，在治疗菌血症、感染性心内膜炎、复杂皮肤软组织感染等方面具有良好的临床应用。

发明内容